石海，孙传梅，洪 亮，孙晋，张孝芸:黄萱益肝丸质量标准研究

(贵州德祥制药有限责任公司，贵州贵阳 550018) 黄萱益肝丸由土大黄、萱草、千里光、南五味子、丹参、甘草等 11味中药组成，具有清热解毒、疏肝利胆的功效，主要用于治疗肝 胆湿热所致的乙型肝炎。该处方的散剂由本公司生产，已用于临床 多年，为便于患者服用，笔者将散剂改型为同处方的丸剂，并对其 质量标准进行了研究。 1 仪器与试剂 三用紫外分析仪(日本岛津)；LC一10ATVP高效液相色谱仪系 列(日本岛津)；包括LC一10ATVP输液泵，SPD一10AVP紫外检测 器,／C100柱温箱，CLASS—VP工作站；硅胶C(青岛海洋化工集团 公司)。南五味子‘批号为1118—0301)、甘草(批号为120904一 200309)、土大黄药材(批号为020604)，均为市售品，经鉴定符合药 典标准；大黄素对照品(批号为0756—200110)，丹参酮ⅡA对照品 (批号为0766—200011)，五味子甲素对照品(批号为0766— 200011)，均购于中国药品生物制品检定所；甲醇(色谱纯，美国)； 黄萱益肝丸(贵州德祥制药有限责任公司)；其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 薄层色谱鉴别IT) 2．1．1 土大黄：取本品研碎的粉末2 g，加甲醇10 mL，加热回流 30 mi，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；取土大黄对照药材1 g， 同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成1 mL含 大黄素0．5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液与对照药 材溶液各10 IxL，对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以石油醚(30．60℃)一甲酸乙酯一甲酸(15：5：1)的上层溶液 为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品 溶液色谱中，在与对照药材及对照品溶液色谱相应位置上显相同 颜色的荧光斑点，阴性对照溶液则无(见图]A)。 2．1．2 丹参：取本品研碎的粉末6 g，加无水乙醇30 mL，加热回 流提取30 min，放冷，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液；另 取丹参酮n真对照品，加无水乙醇制成每1 mL含丹参酮L 1 mg的 溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各10 I,zL，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以苯一乙酸乙酯(l9：1)为展开剂，展开，取出，晾 干。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同的 红色斑点，阴性对照溶液则无(见图l B)。 2．1．3 南五味子：取本品研碎的粉末6 g，加氯仿20 mL，加热回 流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1 mL使溶解，作为供试品 溶液；另取南五味子对照药材l g，同法制成对照药材溶液；再取五 味子甲素对照品，加氯仿制成lmL含五味子甲素l mg的溶液，作 为对照品溶液。吸取上述3种溶液各3—4 μL，分别点于同一硅胶 GF245薄层板上，以石油醚(30。60℃)一甲酸乙酯一甲酸(15：5：1) 的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254 nm)下检 视。供试品溶液色谱中，在与对照药材和对照品溶液色谱相应的位 置上显相同颜色的斑点，阴性对照溶液则无(见图l C)。 2．1．4 甘草：取本品研碎的粉末9 g，加乙醚40 mL，加热回流1 h， 滤过，药渣加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤 过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用 正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁 醇液，用水洗涤3次，蒸干，残渣加甲醇 O．5 mL使溶解，作为供试品溶液；另取甘 草对照药材l g，同法制成5 mL的对照药 材溶液。吸取上述两种溶液各2-4 IxL，分 别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的同 一硅胶C薄层板上，以氯仿一甲醇(20：5) 为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外灯 (365 nm)下检视，供试品溶液色谱中，在 与对照药材溶液色谱相应的位置上显相 同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液则无； 再喷以10％硫酸乙醇溶液，在105％加热 至斑点显色清晰，日光下观察，供试品溶 液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的 位置上显相同颜色的斑点，阴性对照溶液 则无(见图2)。 2．2 大黄素含量测定 2．2．1 色谱条件与系统适用性试验：参考《国家中成药标准汇编． 内科肝胆分册》(国家药品监督管理局，2002年95页)中的条件并经 试验，色谱柱采用HypersilODSC．。柱(150mmx4．6mm，5μm)，柱 温为室温，流动相为甲醇一o．25％磷酸(80：20)，流速为1．1 mL／min， 检测波长为436 nm，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3 000。 此条件下的色谱图见图3。 2．2．2 溶液制备：取经五氧化二磷干燥至恒重的大黄素对照品适 量，精密称定，加甲醇制成l mL含大黄素0．05 mg的对照品溶液； 精密称取本品研碎的粉末2 g，置索氏提取器中，加乙醇适量，加熱 回流提取至五色，提取液浓缩至约5 mL，放冷，加入稀盐酸5 mL， 氯仿30 mL，加热回流30 min，放冷，分取氯仿液，水液用氯仿振摇 提取2次(20，15 mL)，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并移 至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液即得供 试品溶液。 2．2．3 线性关系考察：精密吸取大黄素对照品甲醇溶液4，8，12， 16，20 μL进样，以峰面积为纵坐标(r)、大黄素浓渡为横坐标(x) 绘制标准曲线，回归方程为扩：2 242 524．709X+30 659．1．r： o．999 7，拟合的直线方程为r：2 283 036．205X，将一供试品的峰 面积代人上两式计算，结果的RSD为0．88％，由此可视截距为o，可 用外标一点法计算。大黄素浓度线性范围是0．206 l—1．032 Ixg／mL。 2．2．4 精密度试验：精密吸取大黄素对照品溶液10 μL，依法测 定峰面积，重复试验5次。结果的RSD：1．02％。 2．2．5 重现性试验：精密称取同批样品2．O g，按供试品溶液制备 方法制备成供试品溶液，按含量测定方法连续进样5次，测定峰面 积，计算出大黄素含量平均值：O．317 6 nag，RSD：o．82％。 2．2．6 加样回收试验：精密称取已知含量的样品内容物1．1 g，共 6份，分为3组，分别加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备 成供试品溶液，依法测定，结果见表l。 2．2．7 样品含量测定：分别取大黄素对照品和3批样品，按制备 方法制成对照品溶液和供试品溶液。测定峰面积，计算含量，结果 批号为040601，040602，040603的3批样品中大黄素含量分别为 0.302,0.318,0.309mg／g. 3 讨论 本品为棕色至棕褐色水丸。方法学考察表明，该法回收率高、 重现性好、简便、迅速、准确，可用于黄萱益肝丸质量控制。

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