方和桂：基因技术在中药鉴定中的应用

　　中药是中华民族的瑰宝。我国中药资源十分丰富，商品药材的种类繁多，其疗效与药材品质有着密不可分的关系。 　　因此，为了保证用药的安全有效，准确、迅速、简捷的鉴别方法的建立成为当务之急，而经典的来源、性状、理化性质鉴定方法并不能满足中药真伪、优劣鉴别的需要，尤其是不能满足对如动物药材、道地药材、加工炮制的药材以及中药复方制剂组方鉴定的需要。近年来，随着生物技术层出不穷，中药的鉴别方法也发生了突飞猛进的发展，尤其是基因技术在中药鉴定中的应用，对中药鉴定学科产生了深远的影响。基因技术在中药鉴定中的应用以DNA分子遗传标记技术和mRNA差异显示技术为代表。 　　l DNA分子遗传标记技术 这是一种根据不同生物个体遗传物质DNA的差异来鉴别生物物种的方法。生物的外观性状、细胞形态、组织结构、化学成分、蛋白质等不仅受遗传因素的影响，还与生物的生长环境、发育阶段、生理状态有关。而DNA作为遗传信息的直接载体，不受上述因素的影响，因此DNA分子遗传标记鉴别药材的方法具有高度的准确性与可靠性。 　　1．1 随机扩增多态DNA技术(RAPD)：用任意非特异性的单引物在低温条件下与模板复性并进行PCR扩增，可对研究对象的基因组DNA做多态性分析，获得DNA指纹图谱。通过RAPD技术找出真品特定的DNA片段，对此测序并制备DNA探针来检测相应的药材。RAPD技术尤其适用于贵重药材的鉴定。梁之桃等[1]利用RAPD技术对正品柴胡及其混淆品进行分子水平鉴定，为中药柴胡类药材的分子鉴定提供依据，同时探讨了它们之间的亲缘关系。丁建弥[2]在比较野山人参和栽培人参的80个引物的RAPD图谱中发现一个引物能产生稳定的、可重复的野生山参特征条带，可以用来鉴定野山人参。 　　1．2 限制性片段长度多态性分析技术(RFLP)：将药材DNA用限制性内切酶消化后，进行限制性片段长度多态性分析，确定其基因的种属特异性，如5种海马的鉴别[3]。亦可对药材DNA的PCR扩增产物进行限制性片段长度多态性分析，找出种属特异性来鉴别中药。 　　1．3 扩增片段长度多态性分析技术(AFLP)：ALFP是在RAPD和RFLP技术上发展起来的DNA多态性检测技术。具有RFLP技术高重复性和RAPD技术的简便快捷的特点，不需像RFLP一样制备探针，此技术已经成功地用于遗传多样性研究、种质资源鉴定方面的研究、构建遗传图谱等。罗志勇等[4]首次用AFLP技术构建人参和西洋参的指纹图谱，具有丰富的多态性，对鉴别真假人参、人参品种提供了非常有效的工具。虚泓等[5]用AFLP技术对石斛属植物进行了鉴定，具有快捷、准确、可信度高的特点。1．4 直接对某基因片段PCR扩增产物测序，找出其种属特异性来鉴别中药，其中常用的基因片段包括线粒体细胞b色素和rRNA基因等。如龟甲的鉴定[6]。 　　2 mRNA差异显示技术 该法旨在找出不同组织或细胞在基因表达上的差异，是通过将RNA反转录成单链cDNA，然后PCR扩增，最后分离不同分子大小的DNA，挑选出有差异表达的基因进行序列分析，这样既可以制备探针用于稳定灵敏的检测实验，亦可制备其蛋白产物及其抗体进行免疫检测。借助该技术可以将种植与野生的植物药、道地药材与普通药材之间的差异鉴别出来。 　　3 结语 利用基因技术鉴别中药的方法与传统的中药鉴别方法相比具有准确性高、重现性好、真实、稳定、可靠的优点。基因技术在中药鉴定实践中的不断应用和日臻完善，将为革新法定的药品检验方法奠定坚实的基础。 　　References： 　　[1] Liang Z T，Qin M J，Wang Z T，以口z．Identification of Bupleurum L．plants by RAPD technology[J]．Chin Tradit Herb Drugs(中草药)，2002，33(12)：1117—1119． 　　[2] Ding J M，Wan S W，Mei Q C，et al. RAPD differentiation of wild ginseng species[J]．Chin Tradit Pat Med(中成药)， 2001(1)：3-4． 　　[3] Wu P，Zhou K Y，Zhang Z H．Molecular genetic marker identification for traditional Chinese drug Hippocampus口]． Acta Pharm Sin(药学学报)，1998，22(3)：226-233． 　　[4] Luo Z Y，Zhou G，Zhou SQ，et al．Construction of genomic DNA fingerprintint in Panax ginseng and P．quinquefolium by AFLP[J]．Acta Pharm Sin(药学学报)，2000，35(8)： 626—629． 　　[5] Yu H，He R，Ni N C，et al. Fingerprinting alalysis of plants 0f Dendrobium Sw．by AFLP[J]．Chin Tradit Herb Drugs (中草药)，2004，35(7)：808-810． 　　[6] Study on PCR identification of the Chinese crude drug Oviductus Ranae LJ]．Chin J AppZ Environm Biol(应用与环境生物学报)，2000，6(2)：166—167．

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