前列腺I号水丸对慢性细菌性前列腺炎大鼠前列腺细胞凋亡的调控作用

　　1材料

　　健康成年雄性Wistar大鼠l00只，体重250—3009，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。前列腺l号水丸(龙胆草、栀子、柴胡、川楝子、牛膝等12味药组成)：由黑龙江中医研究院制剂室提供，批号：20040701。标准大肠杆菌E．coli噬菌体：由黑龙江中医药大学微生物科研室提供。Olympus光学显微镜：日本。赛多利斯DP一61型电子天平：德国。

　　2方法

　　2．1动物分组与造模适应性饲养1周，将100只大鼠随机分为5组，分别为正常组，模型组，高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组2D只。除正常组外，其余4组全部造模。大鼠(0．Sml，kg)在无菌条件下腹腔注射20％乌拉坦(0．5nd／kg)进行麻醉，固定大鼠四肢于固定板上，下腹部去毛。在下腹部前列腺体表部碘酒、酒精常规消毒。于大鼠尿生殖隔上方，腹中线行约1．5cm纵形切口，切口达腹腔，用镊子轻轻提起膀胱及两侧精囊，暴露附于精囊内侧的前列腺背叶，在两侧前列腺背叶包膜下分别注射预先配制好的大肠杆菌菌液各0．05ml(大肠杆菌含量107个／ml)，还纳前列腺于原位，全层缝合腹壁肌肉、皮肤后，酒精棉球擦净切口表面血迹，造模结束。

　　2．2给药造模1个月后，开始给药。正常组和摸型组：给予生理盐水(IOml，kg)灌胃，低剂量组：给予前列腺I号水丸1．1g，中剂量组：2．29/kg，高剂量组：4．4g，kg，均灌胃给药，每日1次，连续35天。

　　2．3标本刺备与观察方法处死大鼠，取前列腺常规处理，石蜡包埋，切片厚度5pm，裱与用防脱片剂APES处理过的载玻片上，置45℃温箱烤片24小时。切片常规脱蜡至水。磷酸缓冲液(PSS)．01tool，pH7．4)冲洗5分钟×2次。滴加蛋白酶K，消化5分钟，PSS冲洗5分钟×2次。吸干切片周围水分，滴0．3ml吨02室温l5分钟以灭活内源性酶，PBS冲洗5分钟×2次。吸干切片周围水分．滴加末端标记酶置37℃水浴30分钟，PBS冲洗5分钟×3次。滴加抗荧光抗体，置37℃水浴30分钟，PBS冲洗5分钟x 3次。DAB显色10分钟，蒸馏水洗。甲基绿复染10分钟，蒸馏水洗。正丁醇脱水×3次。二甲苯透明x 2次。树脂胶封同。用光学显微镜观察大鼠前列腺细胞凋亡情况。

　　3结果

　　正常组：基本未见异常，偶见凋亡细胞。模型组：腺上皮细胞大量凋亡，可见深棕黄色凋亡小体，小体之间界限清楚，上皮屏障破坏，腺腔形状不规则，少量核碎片；见到少量炎细胞。高剂量组：腺上皮、间质散在凋亡小体，小体之间界限尚清，上皮屏障欠规整。上皮细胞体积基本正常，未见炎细胞。中剂量组：在前列腺组织上皮和问质散在分布少量凋亡细胞和小体，上皮细胞体积基本正常，腺腔大，未见炎细胞，前列腺上皮间断分布深棕黄色凋亡小体，小体之问界限清楚，上皮厚度较好，上皮屏障存在。低剂量组：上皮屏障尚在，见少量深棕黄色凋亡小体，小体之间界限清楚，散在分布在前列腺上皮细胞和问质，上皮细胞体积基本正常，腺腔大。

　　4讨论

　　细胞凋亡是指在生理情况下机体自我选择和控制的积极主动的“细胞自杀”过程，即程序性细胞死亡。细胞凋亡区别于坏死的重要不同点就是凋亡的细胞能被巨噬细胞或周围组织细胞清除丽不引发炎症反应，可见通过凋亡方式清除炎症灶内多核中性粒细胞和其他滞留细胞，是限制组织损伤和促进炎症吸收的重要机制。本文观察结果表明模型组前列腺上皮细胞大量凋亡，上皮屏障破坏，腺腔形状不规则，存在大量炎症细胞，说明前列腺感染病原体后可引起宿主细胞凋亡，破坏组织、细胞的屏障作用。水丸组前列腺上皮细胞凋亡明显减少，上皮屏障恢复，炎症细胞凋亡增加，炎症减轻。说明前列腺I号水丸能有效凋控细胞凋亡，减轻组织损伤。

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