RP-HPLC测定仁青常觉中士的宁的含量

黄志芳， 易进海， (四川省中药研究所 成都 610041、 德 吉 贡 布 (西藏自治区藏医院 拉萨 850000、 仁青常觉系藏族验方，收载于中国药典2005年版一部，由珍珠、朱砂、檀香、降香、沉香、诃子、牛黄、麝香、西红花、马钱子等药味加王制成的丸剂。具有清热解毒，调和滋补之功效，用于“龙、赤巴、培根”各病，陈旧性胃肠炎、溃疡，“木布”病，萎缩性胃炎，各种中毒症；梅毒，麻风，陈旧热病，炭疽，疖痛。干黄水，化脓等，”。中国药典未收载含量测定方法，本品马钱子中士的宁既是有效成分，又是毒性成分，为了确保仁青常觉的安全性和有效性，故采用RP-HPLC法测定士的宁的含量，结果显示该方法简便可行。重现性好，为控制仁青常觉的质量提供一个参考方法． 一、实验方法与结果 1．仪器与试药 高效液相色谱仪：包括Waters 1525泵．2487双通道紫外检测器，Waters柱温箱，Breeze液相色谱工作站，Brasson超声清洗仪，雷磁pHS-25型pH计。 仁青常觉(西藏自治区藏药厂提供)，大丸：lg／丸，小丸：0．25g/丸士的宁对照品(中国药品生物制品检定所，批号0705-200005)；甲醇为美国Tedia色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。 2．方法与结果 (1)色谱条件。 色谱柱：Diamonsil(TM)钻石C18，4．6x200mm，5μ；柱温：35℃；流动相：甲醇-0．01mol／L磷酸二氢钾溶液(25：75)(用10％磷酸溶液调节pH至2．5))；检测波长：254nm；流速：0．8mL／min。理论塔板数按士的宁峰计算，应不低于2000。在此色谱条件下．士的宁对照 品、仁青常觉样品、阴性对照品的色谱分别见图1、图2、图3。供试品溶液中士的宁峰达到基线分离。阴性对照品溶液无干扰，基线稳定，方法可行。 (2)线性关系。 精密称取士的宁对照品4．74mg．置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1．0mL，置10mL量瓶中。用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取上述对照品溶液(0．01896mg／mL)2，4，6，8，IOwL，注入液相色谱仪中测定。结果士的宁在0．03792-0．1896μg范围内呈良好线性关系，以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标作回归曲线，Y=2888132．9X-33438．4，r=0．9999。 (3)检测限与定量限。 在选定的色谱条件下，当信噪比为3时。测得士的宁的最低检测限为0．4ng：当信噪比为10时。测得士的宁的定量限为1．4ng。 (4)供试品溶液的制备。 取本品粉末(过三号筛)约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中。精密加氯仿50mL与浓氨试液2mL，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24h，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取滤液20mL，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→)100)提取5次，每次20mL，合并硫酸液，加浓氨试液调至pH9-10，用氯仿提取5次，每次20mL，合并氯仿液，减压蒸干，残渣用流动相溶解，转移至10mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。 (5)精密度实验。 取供试品溶液(批号：030113)，重复测定5次；结果精密度好，RSD为0．83％(n=5)。 (6)重现性实验。 取样品粉末(批号：030113)照(4)项下方法分别制成供试品溶液5份，依法测定，结果 重现性好。士的宁的含量为0．0256％，RSD为1．48％(n=5)。 (7)稳定性实验。 取供试品溶液(批号：030113)，于室温放置24h后依法测定，结果稳定，RSD为0．56％(n=5)。 (8)加样回收率实验。 分别取已知士的宁含量的样品(批号：030113，0．0256％)0．5g，精密称定，分别准确加入0．7，0．9，1．1mL的士的宁对照品溶液(0．144mg／mL)，照(4)项下方法制成供试品溶液。依法测定，结果见表1。 (9)样品含量测定。样品3批，分别依(4)项下方法制成供试品溶液，依法测定，士的宁含量测定结果如表2。 二、讨 论 1．仁青常觉是100余味的大处方丸剂。成分很复杂。本文采用的供试品制备方法具有选择性。可有效去除杂质。曾以中国药典2000年版一部马钱子药材项下色谱条件对样品进行测定，结果分离效果差，基线不回零。且拖尾严重。经比较研究，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。甲醇一0．01mol／L磷酸二氢钾溶液(25：75)(用10％磷酸溶液调至pH2．5)为流动相，样品分离效果理想。 2．因为士的宁既是有效成分，又是毒性成分．为了确保仁青常觉的安全性和有效性，故暂订仁青常觉含马钱子以士的宁(C21H22N真0，)计，小丸应为0．04~0．08mg，大丸应为0．17~0．32mg。

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