傣药喃该罕(石斛)黑斑病的研究

　　石斛俗称黄草、吊兰花，是一种多年附生草本植物…。近年来，由野生转为人工栽培，发展十分迅速。随着集约化栽培面积的日益扩大、种苗带病、重复种植等原因，石斛病害日趋严重，每年初夏、秋末症状更为明显。为了防治该病害，对其进行了研究。

　　1材料与方法1．1病害调查方法：每年5月下旬至lO月下旬，每隔10天到田间普查1次，将病株采回室内作详细症状观察记录，并作临时玻片镜检观察病原，分离症状典型病株的病原，按柯赫氏法则进行病原鉴定。1．2病原鉴定：病株于2007年5月采自普洱市民族传统医药研究所试验地。按病菌分离母子纯化的常规操作法，进行病原菌的分离和纯化(培养温度25～28"(2)所得纯菌株作致病性试验。对有致病力且引起的症状与分离到同一病菌的确定为鉴定菌株，保存供进一步鉴定。1．3致病性检测1．3．1健康寄主植物株的培育：将无菌培养的组培苗，按每瓶留一株，待3片真叶时接种。1．3．2接菌方法和症状观察：取纯培养鉴定菌株PDA平板菌落外缘同一圆周上直径4mm的菌饼，分别接种在刺伤和没刺伤的健康幼苗叶上，同一种处理各接2瓶进行对照，接种后和对照株一起放于盛无菌水的培养箱中，培养36h后置于正常条件下观察发病情况和症状，作好记录。1．4菌株鉴定：采用方中达介绍的采用PDA平板培养法和玻片培养法，观察供鉴定菌株的形态。接菌的PDA平板置于25*(2培养7d，每天观察菌丝生长、菌落形态特征等培养性状。玻片培养置于25*(2培养箱内，每天定时镜检记录菌丝变化，分生孢子梗及分生孢子的形成方式并测量其大小、有元菌核产生、菌核形态等，将观察的形态特征对照检索分类确定其种。 I．5病菌生长温度的关系?：用无菌打孔器在培养3d的鉴定菌株pDA平板菌落外缘相同半径圆周上，打取圆形菌饼(d=4mm)，移植至10Mr．／皿PDA平板中央，使饼长有菌丝的一面与培养平贴，分别置于0、10、20、25、30、35、40下培养，重复3次，分别1、2、3、4d，用十字交叉法测量落生长直径(菌落生长直径：实测菌落直径一菌饼直径)，计算菌落生长直径平均值，分析菌丝生长温度范围和最适生长温度。

　　2结果与分析2．1症状：该病在5--7月和9下旬至10月雨季发生流行，危害石斛叶和叶柄。叶片受害一般从叶尖或叶缘开始发病，病斑初呈暗绿色至暗黑色水渍状斑块，逐渐扩展至全叶。发病过程中如遇天气转晴，病斑逐渐停止扩展。2．2病菌的形态特征：供鉴定的菌株在PDA平板上培养3天，菌落质地疏松，菌丝初为红褐色渐渐变为黑色，气生菌丝生长旺盛，棕毛状。4d后在分生孢子梗顶部产生许多肉眼可见的黑色小点，镜下观察为簇生的卵形分生孢子团。4d后培养基中形成梅花状着生，初为红褐色后转为黑色的块状菌核，菌核半埋生于培养基中。菌株经玻片培养镜检，菌丝有隔，直径2～6．5um，5d后分生孢子梗从菌丝上近90um、长度256～534um，顶端分枝，分枝末端膨大成头状，其上簇生卵形分生孢子，孢子大小为(4～7)UlTI，7d后病菌产生块状黑色菌核。根据上述形态特征检索对照有关文献，确定该菌为柱盘孢属，柱盘孢菌。2．3病菌生长适宜温度：根据黑斑病菌在不同温度培养1、2、3、4d菌丝生长情况表明，该菌生长温度范围为0～30"(2；最适生长温度为20-25"C与详见表2。

　　3结论3．1从研究结果可确定，危害石斛叶、茎、病斑呈暗红色至黑褐色水渍状软腐，病部出现大量黑色病害的病原菌是柱盘孢属真菌、柱盘孢菌感染后所形成的症状，田间很容易发现。3．2查阅参考文献获知，柱盘孢菌引起多种植物黑斑病，尤其是在石斛的人工种植过程中最为常见，但对其在石斛的人工种植中如何防治或生活规律未见报道。研究证明石斛是该菌的寄主，由于本病由柱盘孢菌所引起，症状和已报道的黑斑病相似，故将这种病害称为石斛黑斑病。3．3病菌适宜生长温度测定表明，该菌生长温度为0～30℃，40℃以上不能生长，最适生长温度20～25'12，与文献报道的柱盘孢菌菌丝生长温度基本相同，仅最适宜生长温度最低12℃，这可能是菌株不同所致，在人工培养中超过35"(2生长缓慢。3．4众所周知柱盘孢菌以菌核越冬，春季由菌核所形成的分生孢子侵染寄主，在寄主的茎叶表面发生了黑斑病。3．5从2003年至2006年的田间统计情况看，该菌可直接从石斛表皮或伤口侵入，造成危害。黑斑病发生需要高湿环境，在春季、夏初和秋末多雨时，要作好该病防治工作。3．6光照不良、阴雨连绵等不良的栽培条件是该病流行的重要因素，特别是缺钾肥发病更为严重。

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