超声波提取大蒜总黄酮及鉴别

大蒜，百合科多年生草本植物大蒜Auium  sativum.L．的鳞茎。《名医别录》中指出，大蒜具有“散痛肿匿疮”，“除风邪，杀毒气”等功用；《新修本草》中说大蒜可“下气、消谷、化肉”；《本草纲目》称大蒜有“化腐朽为神奇”的作用，“能辟邪恶，消痈肿”。现代医学研究结果表明，大蒜中含有的氨基酸、维生素、大蒜素、黄酮类化合物等，对多种致病菌都有抑制或杀灭作用，可用于恢复疲劳、预防高血压病、预防动脉硬化、预防寒疟、预防感冒、预防高血脂症，其中所含的微量元素硒和硫，能够增强人体的免疫功能。同时可治疗痈疖肿胀、钩虫、蛲虫病、顿咳、痢疾、泄泻等。因大蒜含黄酮类等，有多种药用价值。

    近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。超声技术应用于提取大蒜中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取大蒜总黄酮及鉴别。

1  仪器与试剂

1．1  仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；UV-755B紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂)；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。

1．2  试剂95％乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；正丁醇AR氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；镁粉AR；乙酸镁粉AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品(中国药品生物制品检定所)；广西百色市人民菜市市售大蒜。

2方法与结果

2．1  总黄酮成分提取取大蒜辦，烘干，粉碎。称取大蒜粉末约6 g，加80 m1 95％乙醇，超声波提取2．5 h，抽滤。滤渣再加80 m195％乙醇，超声波提取2．5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml左右为止，放置250 ml容量瓶中，用60％乙醇稀释至刻度，得样品液。

2．2  测定方法依据以芦丁为对照品测定大蒜中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

2．3  定量实验一总黄酮的含量测定

2．3．1  波长的选择取样品液适量，在0．30 ml 5％亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420~700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

2．3．2  标准曲线的绘制  分别精密吸取芦丁对照液(0．10 mg/m1)0．00，0．50，1．00，2．00，3．00，4．00，5．00 ml于10．OO m1容量瓶中，分别加入5％亚硝酸钠溶液o．30 ml，摇匀，静置6 min；再加10％硝酸铝溶液0．30 m1，摇匀，静置6 min；再加4％氢氧钠溶液4．00 m1，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测定吸光度。结果见表l。

    根据上表得回归方程：A=一0．031 l+13．518 4C，r=O．999 9。

2．3．3  提取物含量的测定精密吸取样品液5．00 ml，置10．00m1容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0．228，根据回归方程：A=-0．031 1+13．518 4C，计算样品中总黄酮的含量C=3．833％，提取率远远高于醇提法。

2．3．4  回收率实验精密量取样品液2．OO ml，加入标准芦丁对照品2．00 m1(0．10 mg/m1)，同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为101．9％。

2．4  定性实验一总黄酮的鉴別

2．4．1  颜色反应

    紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。

    浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30 s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。

    三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。

    乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1％乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。

    盐酸．镁粉反应：取乙醇提取液lml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴(1次加入)，在泡沫处呈紫红色。

2．4．2  纸层析取样品溶液10txl点在滤纸上。用正丁醇：醋酸：水：4：1：5(体积比)为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1％氯化铝乙醇溶液。吹于后于紫外光下，可见荧光斑点。

3  讨论

    实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为101．9％，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。

    黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。

    黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫凋节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，大蒜分布广泛，本文实验结果表明，大蒜中含有较为丰富的黄酮。因此，大蒜具有广泛开发和利用价值，值得综合利用加强资源开发。

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