杏苏止咳糖浆的提取工艺研究
核心提示： 杏苏止咳糖浆来源于我院著名老中医在《中药制剂汇编》杏苏合剂处方的基础上加减的经验方，由紫苏叶、苦杏仁、浙贝母、麻黄、桔梗、黄芩6味药组成，具祛风镇咳、平喘除痰的功效，主要用于咳嗽、痰多的治疗。该制剂在我
杏苏止咳糖浆来源于我院著名老中医在《中药制剂汇编》杏苏合剂处方的基础上加减的经验方，由紫苏叶、苦杏仁、浙贝母、麻黄、桔梗、黄芩6味药组成，具祛风镇咳、平喘除痰的功效，主要用于咳嗽、痰多的治疗。该制剂在我院临床应用已20多年，根据临床总结和病人反馈，疗效确切，无明显毒副作用或不良反应，口感好，患者易接受。为了进一步控制质量、保证疗效，为制剂注册奠定良好的基础，按照《中药新药研究技术要求》，有必要对其药材提取工艺进行优化试验，制定严格的质量标准，并进行初步药效学试验，确保临床用药安全有效。
材 料
1药品与试剂
紫苏叶、苦杏仁、桔梗、麻黄、浙贝母、黄芩中药材由本院提供，经鉴定符合《中国药典》2005年版一部相关药材项下规定。苦杏仁苷对照品，由中国药品生物制品检定所提供，批号：820—200002；水为重蒸馏水(自制)；甲醇为色谱纯；试验中所用其他试剂均为分析纯。
2仪器与设备
DW调温加热器2000ml，上海平环燃烧设备工程技术有限公司；挥发油测定器，中国医药(集团)上海化学试剂公司经销；Waters600高效液相色谱仪，Millennium32工作站，Waters2487双通道紫外检测器，美国Waters公司；BP211D十万分之一电子天平，惠普公司；SYZ-B型石英亚沸高纯水蒸馏器；DZF-6000智能数显真空干燥箱，河南英峪予华仪器厂。
方法与结果
l水提工艺
水提取工艺选择对提取物收率影响较大的加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)为考察因素，以苦杏仁苷的含量和浸膏得率为考察指标，选定L9(34)正交表进行试验。正交因素水平见表l。
2试验方法
按杏苏止咳糖浆原处方0．6倍的量，取苦杏仁18g，桔梗18g，麻黄18g，浙贝母12g，黄芩12g，合并紫苏叶提油后的残渣，按正交试验表加水煎煮，滤过，滤液浓缩至100ml，备用。依法测定苦杏仁苷含量和总固物重量。
2．1浸膏得率的测定照 《中国药典》一部附录XA…浸出物测定法，精密吸取提取液10ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，105°C 干燥3h，取出，置干燥器内冷却30min，称重，计算干浸膏得率。
2．2苦杏仁苷的HPLC法测定参考文献[2，3]。
2．3色谱条件色谱柱：Waters Kromasil C,。(4．6mm×250mm,51xm)；流动相：甲醇一水(25：75)；流速：1．0ml／min；柱温25％；检测波长：215nm；进样量：10ul。
2．4对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的苦杏仁苷标准品适量，加甲醇溶解，制成每lml含0．132mg的溶液，作为对照品溶液。
2．5供试品溶液的制备分别精密移取1-9号正交煎煮浓缩液适量，加甲醇10ml振摇提取，离心，过滤，滤液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至50ml，摇匀，用微孑L滤膜(0．45Ixm)滤过，滤液即为供试品溶液。
2．6正交试验结果按照上述苦杏仁苷含量和浸膏重量测定方法，测定1-9号样品溶液，计算，结果见表2。
表2水提取工艺正交试验结果
试验号 A B C D 浸膏得率 苦杏 仁苷
1 1 1 l 1 15．62 2．391
2 1 2 2 2 17．90 2．634
3 1 3 3 3 19．87 1．671
4 2 1 2 3 21．94 2．784
5 2 2 3 1 22．51 1．987
6 2 3 1 2 19．05 2．210
7 3 1 3 2 21．05 2．60
8 3 2 1 3 18．08 2．374
9 3 3 2 1 20．87 2．602
K1 53．39 58．61 52．75 59．0
K2 63．5 58．49 60．71 58．0
K3 60．0 59．79 63．43 59．89
R 10．11 1．30 10．68 1．89
K1 6．696 7．775 6．975 6．98
K2 6．981 6．995 8．02 7．444
K3 7．576 6．483 6．258 6．829
R 0．88 1．292 1．762 0．615
表3浸膏得率方差分析
方差来源离差平方和 自由度 方差 F值 P值
A 9．87 2 0．067 1．97 >0．05
B O．34 2 0．38 11．18 >0．05
C 20．50 2 1．41 41．47<0．05
~D 0．6 2 0．30
从F界值表查得0．05(2．2)=19．00,F0．01(2．2)=99．00
表4苦杏仁苷含量方差分析
方差来源离差平方和 自由度 方差 F值 P值
A 0．1342 2 4．89 16．3 >0．05
B 0．282 2 O．17 0．58 >0．05
C 0．5232 2 10．25 34．20<0．05
误差D O．0683 2 0．30
从F 界值表查得fO．05(2．2)=19．00，F0．01(2．2)：99．oo。
3结 果
可见以浸膏得率为考察指标，各影响的大小依次为：提取次数>加水量>提取时间，最佳工艺为A283C3。对各因素影响的显著性进行了检验，结果见表7。其中提取次数对浸膏得率影响最大，而加水量和提取时间在选择的水平上无显著影响，尤其是提取时间对浸膏得率影响很小。因此，生产中从缩短提取时间提高效率考虑，最佳优选条件组合是A281C3。即加10倍量水，提取3次，每次提取1h。
对苦杏仁苷而言，影响含量的因素大小依次为提取次数>提取时间>加水量，其中提取次数为主要影响因素(P<0．05)。由直观分析得最佳的组合为A381C2。但加水量对苦杏仁苷的含量无显著性影响，考虑到生产节约能源，加水量选用2水平。其提取工艺优选方案为A281C2，即加10倍量水，提取2次，每次提取1h。
考虑到中药复方的作用，确定水提取最佳方案为A281C3。即加10倍量水，提取3次，每次提取1h。
4验证试验
按处方比例分别称取苦杏仁、麻黄、桔梗、浙贝母、黄芩及紫苏叶提取挥发油后的药渣，按已确定的加水量和提取次数、提取时间进行水煎煮，平行试验3次，结果见表10。表明该工艺既能保证苦杏仁苷得到较好的提取，又能得到较高的浸膏收率。
表5最优化工艺重复试验结果
序号 苦杏仁苷／mg•ml-1 浸膏得率／％
1 2．89 23．11
2 2．86 23．56
3 2．85 22．83
讨 论
在中药的浸提过程中，影响的因素很多，用水为溶媒主要影响因素有溶媒用量、浸泡时间、煎煮时间、药材粒度等。中药粒度小，溶媒易于渗入中药颗粒内部，有利于药物成分的扩散。但过细的粉末，吸附作用增强，降低成分的扩散速度；过细粉末浸出杂质也增加，同时造成浸提液过滤困难。杏苏止咳糖浆的组方中苦杏仁、桔梗、浙贝母、黄芩药材为中药配方饮片，颗粒小或为薄片；麻黄属全草类药、紫苏叶为叶子，质地均较疏松，有效成分较易溶出，因此本试验中没把药材粒度作为考察因素之一。
材 料
1药品与试剂
紫苏叶、苦杏仁、桔梗、麻黄、浙贝母、黄芩中药材由本院提供，经鉴定符合《中国药典》2005年版一部相关药材项下规定。苦杏仁苷对照品，由中国药品生物制品检定所提供，批号：820—200002；水为重蒸馏水(自制)；甲醇为色谱纯；试验中所用其他试剂均为分析纯。
2仪器与设备
DW调温加热器2000ml，上海平环燃烧设备工程技术有限公司；挥发油测定器，中国医药(集团)上海化学试剂公司经销；Waters600高效液相色谱仪，Millennium32工作站，Waters2487双通道紫外检测器，美国Waters公司；BP211D十万分之一电子天平，惠普公司；SYZ-B型石英亚沸高纯水蒸馏器；DZF-6000智能数显真空干燥箱，河南英峪予华仪器厂。
方法与结果
l水提工艺
水提取工艺选择对提取物收率影响较大的加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)为考察因素，以苦杏仁苷的含量和浸膏得率为考察指标，选定L9(34)正交表进行试验。正交因素水平见表l。
2试验方法
按杏苏止咳糖浆原处方0．6倍的量，取苦杏仁18g，桔梗18g，麻黄18g，浙贝母12g，黄芩12g，合并紫苏叶提油后的残渣，按正交试验表加水煎煮，滤过，滤液浓缩至100ml，备用。依法测定苦杏仁苷含量和总固物重量。
2．1浸膏得率的测定照 《中国药典》一部附录XA…浸出物测定法，精密吸取提取液10ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，105°C 干燥3h，取出，置干燥器内冷却30min，称重，计算干浸膏得率。
2．2苦杏仁苷的HPLC法测定参考文献[2，3]。
2．3色谱条件色谱柱：Waters Kromasil C,。(4．6mm×250mm,51xm)；流动相：甲醇一水(25：75)；流速：1．0ml／min；柱温25％；检测波长：215nm；进样量：10ul。
2．4对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的苦杏仁苷标准品适量，加甲醇溶解，制成每lml含0．132mg的溶液，作为对照品溶液。
2．5供试品溶液的制备分别精密移取1-9号正交煎煮浓缩液适量，加甲醇10ml振摇提取，离心，过滤，滤液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至50ml，摇匀，用微孑L滤膜(0．45Ixm)滤过，滤液即为供试品溶液。
2．6正交试验结果按照上述苦杏仁苷含量和浸膏重量测定方法，测定1-9号样品溶液，计算，结果见表2。
表2水提取工艺正交试验结果
试验号 A B C D 浸膏得率 苦杏 仁苷
1 1 1 l 1 15．62 2．391
2 1 2 2 2 17．90 2．634
3 1 3 3 3 19．87 1．671
4 2 1 2 3 21．94 2．784
5 2 2 3 1 22．51 1．987
6 2 3 1 2 19．05 2．210
7 3 1 3 2 21．05 2．60
8 3 2 1 3 18．08 2．374
9 3 3 2 1 20．87 2．602
K1 53．39 58．61 52．75 59．0
K2 63．5 58．49 60．71 58．0
K3 60．0 59．79 63．43 59．89
R 10．11 1．30 10．68 1．89
K1 6．696 7．775 6．975 6．98
K2 6．981 6．995 8．02 7．444
K3 7．576 6．483 6．258 6．829
R 0．88 1．292 1．762 0．615
表3浸膏得率方差分析
方差来源离差平方和 自由度 方差 F值 P值
A 9．87 2 0．067 1．97 >0．05
B O．34 2 0．38 11．18 >0．05
C 20．50 2 1．41 41．47<0．05
~D 0．6 2 0．30
从F界值表查得0．05(2．2)=19．00,F0．01(2．2)=99．00
表4苦杏仁苷含量方差分析
方差来源离差平方和 自由度 方差 F值 P值
A 0．1342 2 4．89 16．3 >0．05
B 0．282 2 O．17 0．58 >0．05
C 0．5232 2 10．25 34．20<0．05
误差D O．0683 2 0．30
从F 界值表查得fO．05(2．2)=19．00，F0．01(2．2)：99．oo。
3结 果
可见以浸膏得率为考察指标，各影响的大小依次为：提取次数>加水量>提取时间，最佳工艺为A283C3。对各因素影响的显著性进行了检验，结果见表7。其中提取次数对浸膏得率影响最大，而加水量和提取时间在选择的水平上无显著影响，尤其是提取时间对浸膏得率影响很小。因此，生产中从缩短提取时间提高效率考虑，最佳优选条件组合是A281C3。即加10倍量水，提取3次，每次提取1h。
对苦杏仁苷而言，影响含量的因素大小依次为提取次数>提取时间>加水量，其中提取次数为主要影响因素(P<0．05)。由直观分析得最佳的组合为A381C2。但加水量对苦杏仁苷的含量无显著性影响，考虑到生产节约能源，加水量选用2水平。其提取工艺优选方案为A281C2，即加10倍量水，提取2次，每次提取1h。
考虑到中药复方的作用，确定水提取最佳方案为A281C3。即加10倍量水，提取3次，每次提取1h。
4验证试验
按处方比例分别称取苦杏仁、麻黄、桔梗、浙贝母、黄芩及紫苏叶提取挥发油后的药渣，按已确定的加水量和提取次数、提取时间进行水煎煮，平行试验3次，结果见表10。表明该工艺既能保证苦杏仁苷得到较好的提取，又能得到较高的浸膏收率。
表5最优化工艺重复试验结果
序号 苦杏仁苷／mg•ml-1 浸膏得率／％
1 2．89 23．11
2 2．86 23．56
3 2．85 22．83
讨 论
在中药的浸提过程中，影响的因素很多，用水为溶媒主要影响因素有溶媒用量、浸泡时间、煎煮时间、药材粒度等。中药粒度小，溶媒易于渗入中药颗粒内部，有利于药物成分的扩散。但过细的粉末，吸附作用增强，降低成分的扩散速度；过细粉末浸出杂质也增加，同时造成浸提液过滤困难。杏苏止咳糖浆的组方中苦杏仁、桔梗、浙贝母、黄芩药材为中药配方饮片，颗粒小或为薄片；麻黄属全草类药、紫苏叶为叶子，质地均较疏松，有效成分较易溶出，因此本试验中没把药材粒度作为考察因素之一。
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