乳岩宁方降低阿霉素骨髓毒性作用的实验研究

　　1实验材料

　　细胞株：MCF-7(美国标准生物品收藏中心ATCC)惠赠于昭和药科大学病态科学教研室池岛乔教授。

　　实验动物：雌性BALB/c—nu/nu裸鼠(4—6周龄)30只，体重(20士2)g，购于大连医科大学实验动物中心，实验动物质量合格证号：SCXKGGD2004—0017。

　　药物：乳岩宁方及其制备：由人参、黄芪、自术、茯苓、半枝莲、莪术、白花蛇舌草、山慈姑、薏苡仁、浙贝母等l4味中药组成，本院制备成冻干粉。阿霉素(ADM)Phamaorubin冻干粉针剂，意大利。

　　试刺：DMEM低糖细胞培养液：HyClone美国。特级胎牛血清：天津灏洋生物制品科技有限责任公司。青链霉素混合液(双抗)MC：美国。消化胰酶/EDTA：HyClone美国。磷酸盐缓冲液(PBs)；HyC'lone美国。

　　主要仪器：1.eica倒置显微镜：德国。Henmvet 950FS全自动八物种血液分析仪：英国。

　　2方法

　　2.1  细胞培养人乳腺癌细胞株MCF一7常规培养于含有10％特级胎牛血清，l％青链霉素双抗的低糖DMEM细胞培养液中，37％，饱和湿度，5％二氧化碳细胞培养箱中贴壁培养。当细胞生长至80％融合时。0.25％胰蛋白酶/EDTA消化传代。

　　2.2移植模型的建立培养的MCF一7细胞经胰酶消化后，用PBS液清洗2次，再用l％锥虫蓝染色，在细胞记数板上作细胞记数，并调节使活细胞浓度为l×107/ml，于无菌条件下施行BAl.B/c—rlU/rltl裸鼠左侧胸壁第二乳垫脂肪层下接种0.2roll只，共接种2只，术后BALB/c—nu/nu荷瘤裸鼠继续饲养于SPF环境中，之后连续7天腹腔注射雌激素0.1ml/只，促进肿瘤组织形成，待肿瘤长至O.8cm3时，行BALB/c—ntdnu裸鼠间原位移植。无菌条件下取出乳腺癌组织剪切成1113左右的小块，分别移植于21只BALB/e—nu/nu裸鼠左侧胸壁第--$L垫脂肪层下，5天后可见肿瘤生长，成瘤率l00％。荷瘤裸鼠最长生存时间60天。

　　2.3实验分组与给药将21只MCF一7乳腺癌荷瘤BAIJRIc—llu/rlu裸鼠随机分为3组，每组7只。①空白组；②阿霉素组；③乳岩宁加阿霉素组。空白组每130.2m11只生理盐水灌胃，每间隔4日腹腔注射0。2roll只生理盐水。阿霉素组每日0.2ml/只生理盐水灌胃。每间隔4日腹腔注射0.2ml/P,阿霉素(59/k9体重)。乳岩宁加阿霉素组每日0.2ml/只乳岩宁(1.149/k9体重)灌胃，每间隔4日腹腔注射O.2rnl/只阿霉素(剂量同前)。

　　2.4检测标本采集本实验给药时问为20天。第21天，摘跟球取血，抗凝处理后入Hemavet 950FS全自动八物种血液分析仪行外周血24项检测。颈部脱臼处死各组荷瘤裸鼠，取单侧股骨骨髓行骨髓液涂片。

　　2.5统计学分析采用SPSSl0.0软件包，数据以平均值土标准差(x±s)表示，单因素方差分析，组问比较采用LSD方法。

　　3结果见表1。

　　　　　　　　　　　　　表1 各组骨髓粒细胞计数和白细胞计数的比较(x±s，×l09/L)

空白组            7           2.93±0.45        9.12±0.56

阿霉素组          7           2.04±0.24*        7.27±0.62*

与模型组比较*P<0.05；与阿霉索组比较△P<0.05

　　4讨论　化疗是治疗恶性肿瘤的主要治疗方法之一，以中医的观点，化疗在“攻伐”的同时，往往会出现攻邪伤正的局而，如能配合中医药的扶正和调理，不但可减轻毒副反应，且可起到增效增敏作用。ADM和其它化疗药物一样细胞毒性较大，它在抑制肿瘤细胞生长的同时，也会杀伤正常细胞，对造血系统和免疫系统产生抑制作用。本实验中阿霉素组裸鼠在给药后第10天明显出现进食减少，行动减缓等行为，14天后更见腹泻、皮肤无华、体温下降、眼睛分泌物增多等症状，其它两组表现均优于阿霉素组。中医认为，化疗药物属热毒之邪，化疗后机体正气受损，微小转移灶等残留之邪实与化疗药毒共聚体内，热毒耗气伤阴，损伤气血，肾精不足，从而引起不同程度骨髓造血功能抑制。因此.防治上应以健脾益气、活血补血以及滋肾养阴为主。乳岩宁方中人参补气健脾、生津润肺，人参皂甙Rg3是从人参根浸出液中分离出的一种有效活性成分，具有抑制肿瘤细胞增殖与浸润、抗肿瘤细胞转移、抑制血管内皮细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡及提高机体免疫功能等多种功效。莪术破血行气、消积止痛，其主要成分和挥发油都具有明显抗肿瘤作用，以莪术油为主要成分的榄香烯乳已被认为是一种安全可靠的广谱抗瘤药物，能很好地改善症状，提高生存质量。本实验结果表明乳岩宁有减少乳腺癌荷瘤裸鼠应用阿霉素后血细胞降低及骨髓抑制作用，且作用持久，用药安全、方便，无明显毒副作用。具有良好的应用前景。

(如果您认为转载内容侵犯了您的权益，请及时联系我们，本网站将在收到信息核实后24小时内删除相关内容。)