寿胎丸对自然流产模型小鼠母胎界面INF-r和IL-10表达的影响

　　寿胎丸是临床治疗RSA的有效方剂，为了进-步明确寿胎丸的作用机制，本实验观察寿胎丸对反复自然流产小鼠模型Th1、TH2型细胞因子IFN-7和IL-10表达的影响。

　　1材料同前文。

　　2方法

　　2.1造模将50只雌性CBA/J小鼠分别与20只雄性DBA/2和5只BAlB/e小鼠按2：1合笼交配，检出阴栓者计为妊娠第0天，分别建立反复自然流产模型40只与正常妊娠模型10只。

　　2.2实验分组及给药　　CBA/J×BALB/c孕鼠作为正常妊娠组(10只)，CBA/Jx DBA/2孕鼠作为反复自然流产模型(40只)，按妊娠顺序随机分为模型组(10只)、寿胎丸低剂量组(10只，39/kg)，寿胎丸中剂量组(10只，69/kg)，寿胎丸高剂量组(10只，129/kg)。自妊娠第1天开始灌胃，正常妊娠组和模型组给予等量的生理盐水灌胃，另3组给予寿胎丸混悬液灌胃，直至孕14天。

　　2.3实验药物的制备寿胎丸浸膏的制备：菟丝子4009、续断2009、桑寄生2009、阿胶2009，将4味药混和，置圆底烧瓶中，加10倍量水，用冷凝回流装置加热回流2小时，提取液过滤，残渣加l0倍量水继续加热冷凝回流2小时，提取液过滤，合并两次提取过滤液，浓缩至l9，Inl，冷却，即得寿胎丸浸膏，40c保存备用。

　　2.4 IFN-r/和IL-l0蛋白表达测定免疫组化法检测，同前文。

　　2.5结果判定同前文。

　　2.6统计方法所有计量资料数据均用均数±标准差(x±s)表示，用SPSS l3.0软件对上述检查结果进行单因素方差分析。

　　3结果见表1。

　　　　　　　　　　　　　　　　　表1　　各组小鼠蜕膜组织IFN-r和IL-lO

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表达的平均灰度值的比较(x±s)

正常妊娠组　　　　10　　　　159.75±0.12　　　 146.69±0.13

自然流产模型组　　10　　　　139.78±0.05　　　 162.36±0.11

寿胎丸低剂量组　　10　　　　154.12±0.24*　　　147.77±0.21

寿胎丸剂剂量组　　10　　　　156.32±O.09*　　　148.24±0.05*

　　　　　　　　与正常妊娠组比较*P<0.05；与模型组比较★P<0.05

　　4讨论　Th在妊娠免疫中发挥重要作用，Th细胞根据分泌的细胞因子类型不同分为Th1和Th2和两个亚群，Th1型细胞因子促进巨噬细胞活化、细胞毒作用，主要介导细胞免疫反应。Th2型细胞因子主要介导体液免疫反应，抑制免疫炎症，具有免疫营养作用。妊娠期母体通过复杂的细胞因子网络对妊娠各个生理过程，包括着床、胚胎生长发育以及分娩进行免疫调节。机体处于正常状态时，两型细胞因子处于动态平衡，维持正常的细胞免疫和体液免疫功能。妊娠期母胎间复杂的免疫应答和免疫调节改变了Th1/Th2型细胞因子之间原有的平衡。有学者提出妊娠是-种Th2现象，Th1型细胞因子对妊娠不利。大量临床与实践研究表明，母体在妊娠时，型细胞因子参与的体液免疫起主要作用，而由Th1型细胞因子参与的细胞免疫则受到抑制，许多学者就Th1/Th2型细胞因子对妊娠的作用与机制做了大量的研究，并推测Th1型细胞因子不利于妊娠，Th2型细胞因子抑制Th1型细胞因子的产生，利于妊娠。越来越多的研究表明，RSA与免疫反应调节密切相关。有研究证实Th2型细胞因子对维持妊娠是有益的，在阻止小鼠自发性流产中发挥重要作用。有人引对正常妊娠、有习惯性流产史(经随访此次妊娠成功)、习惯性流产(此次亦流产)孕妇血清中Th1/Th2型因子检测，发现正常妊娠妇女血清中，Th2型因子IL-6、IL-10显著高于习惯性流产组，而后者TNF-a水平增高。而习惯性流产史孕妇的IL-6浓度高于习惯性流产组，TNF-a表达水平降低。以上表明，习惯性流产患者存在着Th1,/Th2型因子失衡，有许多学者又对其机理做了进-步研究。研究发现，TNF-a可以诱导孕妇单核细胞趋向于母胎界面-合体滋养细胞层，损害滋养细胞，使其凋亡；IFN-r/抑制滋养层的生长，并与TNF-a协同作用，可抑制胚胎与胎儿的生长发育。Paradisi等观察了人胎盘组织细胞因子之间生物学效应，发现IFN-r和TNF-a都可诱导培养的胎盘组织分泌前列腺素E(PGE)，而IL-4、IL-10却可以抑制这-效应。可见，Th1，型细胞因子可以诱发前列腺素类物质的合成，促进子宫收缩，导致流产的发生，Th2型因子则可抑制这种生物学效应。综上所述，Th1/Th2型细胞因子向Th1漂移与BSA有关。

　　寿胎丸源自清代名医张锡纯的《医学衷中参西录》，为益气健脾的保胎名方，方中菟丝子补。肾养精、益阴而固阳；桑寄生、续断固肾强腰系胎又止痛；阿胶滋阴养血又止血；四味药物，配伍严谨，不温不寒，补而不滞，达到保胎养胎之目的。大量临床研究表明寿胎丸是治疗RSA的有效中药复方，目前的研究认为寿胎丸的保胎作用是多因素、多机制综合作用的结果。本课题对寿胎丸发生药效的机制特别是分子机制进行研究，利于其进行新药开发，并且为中医药治疗RSA提供实验室依据。本实验结果表明，Th1型细胞因子WN-r和IL-10的适量表达有利于妊娠的维持，但是如果IFN-r过度表达、IL-10表达不足将导致流产，而寿胎丸能够调节其表达，从而起到保胎作用。

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