黄芪对AnglI诱导人足细胞分泌VEGF的影响
血管内皮细胞生长因子(VEGF)是-种二聚体糖蛋白，在肾脏主要由足细胞产生，有增加血管通透性、促进内皮细胞增生和血管形成作用，VEGF能减少肾小球基底膜阴离子数而影响电荷屏障，并通过影响肾小球内皮细胞而调节滤过膜机械屏障，因而VEGF被认为是调节肾小球通透性的重要因子；VEGF的异常分泌增加将导致肾小球滤过膜通透性增加，促进蛋白尿形成。本研究将探讨血管紧张素Ⅱ (Aw.n)对足细胞分泌VEGF的影响及中药黄芪的保护作用。
1材料足细胞：由英国Bristol大学Saleem教授惠赠。An.sn：Anaspec公司。黄芪注射液：大理药业有限公司。RP-M11640培养液：Sigma公司。10％胎牛血清：杭州四季青。1％rrs(胰岛素10p9/ml、转铁蛋白5.5t,Cml、亚硒酸钠5ng/ml)：Sigma公司。Trizol引物合成：上海生工。
2实验方法
2.1足细胞培养培养方法参考Saleem方案，培养基为RPMll640培养液，含10％的胎牛血清，1％ITS在33℃、5％C02培养箱中传代增生，细胞成鹅卵石状之后转入37℃、5％CO2培养箱中两周，使其分化成熟为树枝状时接种于25cm2的培养瓶中，待细胞生长至80％融合，无血清同步12小时后进行实验。
2.2 AW.n浓度梯度对人足细胞VEGF基因表达的影响
干预细胞各组中分别加入An9Ⅱ，其终浓度分别为0、10-9、l0-8、l0-7mol/L，培养24小时后收集细胞。
2.3实验分组空白组：AngII组(10-7mol/L)；黄芪小剂量组：AnglI(10-7mol/L)+黄芪(10g/L)；中剂量组：AnslI(10-7mol/L)+黄芪(100g/L)，大剂量组：Angll(10-7mol/L)+黄芪(200g/L)，培养24小时后收集细胞。
2.4足细胞VEGFmRNA表达测定 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)。
2.5统计分析实验数据以均数±标准差(x±s)表示，采用SPSSll.
3结果
3.1不同浓度An9Ⅱ对足细胞VEGFmRNA表达的影响见表1
表1 不同浓度All9Ⅱ对肾小球足细胞
VEGF'mRNA表达的影响(z±s)
组别 剂量 光密度值(VEGF/GAPDH)
空白组 0mol/L 0.46±0.08
An9Ⅱ组 l0-9mol/L 0.67±0.11
An9Ⅱ组 l0-8mol/L 0.96±0.31
An9Ⅱ组 l0-7mol/L l.46±0.58**
与空白组比较*P<0.05。**P<0。01
3.2黄芪对AW.Il刺激足细胞表达VEGF的干预作用见表2
表2黄芪对AnSll刺激足细胞VEGFmRNA表达的影响(x±s)
组别 剂量 光密度(VECf/GAPDH)
正常组 0.19±0.15
AngⅡ组 10-7moFL 0.69±0.0866
黄芪小剂量组 1
黄芪中剂量组 1
黄芪大剂量组
4讨论蛋白尿是肾小球疾病的临床表现之-，它不仅是肾小球滤过屏障受损的标志，而且与肾小球疾病的进展关系密切，是肾小球疾病进展的独立危险因素。近年研究表明足细胞在维持正常肾小球选择性滤过屏障方面具有至关重要的作用，足细胞结构和功能的异常可以直接导致蛋白尿的发生。血管内皮细胞生长因子(VEGF)在肾脏主要由足细胞产生，肾小球内皮细胞表达VEGF受体，而肾小球足细胞和内皮细胞是构成肾小球滤过膜的重要成分。大量研究表明，VEGF与蛋白尿的形成有密切的关系，金琳等研究发现，以系膜增生为主的IgA肾病，肾小球内VEGF表达明显增多，且大量蛋白尿发生率明显增加。Bailey等发现微小病变肾病综合征患者肾组织中VEGF明显上调；Wasada等也发现糖尿病肾病患者的尿蛋白与VEGF水平呈正相关，以上研究提示VEGF的异常分泌增加将导致肾小球滤过膜通透性增加，促进蛋白尿形成。
肾脏局部的肾素血管紧张素系统(Renin—AngiotensionSystem，RAS)在慢性肾脏病变的发生发展中的重要作用越来越受到人们的关注，RAS的主要效应因子血管紧张素II(AngⅡ)已被公认与许多肾脏疾病的发展过程密切相关。Angll既可以通过收缩肾脏血管引起肾脏局部血压升高，对肾脏固有细胞造成损伤；也可以刺激肾脏固有细胞分泌转化生长因子等造成肾脏的损伤。应用抑制血管紧张素Ⅱ药物可以减轻肾损伤，降低蛋白尿。黄芪是中医治疗慢性肾病的常用药物，近年的临床研究表明，黄芪具有利尿消肿，减少尿蛋白、调节免疫、稳定肾功能等作用。动物实验证明，黄芪可降低链脲佐菌素致糖尿病大鼠尿蛋白的排出，并可抑制肾肥大，减轻肾小球基底膜增厚，降低糖尿病大鼠肾皮质Ⅳ型胶原和TGF—B的表达。本研究表明AngⅡ可以剂量依赖性地引起足细胞分泌VEGF的增加，而黄芪可以明显抑制由AIlgⅡ所引起的足细胞分泌VEGF的增加。为临床黄芪的应用提供了进-步的理论依据，至于其通过何种途径减低VEGF的分泌，有待继续研究。
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