黄药子配伍当归合煎液与单煎混合液主要成分的含量比较

黄药子为薯蓣科植物黄独(Dioscorea bulbifera L．)的块茎，性苦寒，有小毒，近年来实验研究表明，其毒性成分二萜内脂类黄独乙素有一定的毒性，可引起肝脏一系列的病理变化。当归与其同用，可起到抑制其毒性作用。几千年的临床实践证明了中药配伍的科学性，但用现代科学的方法阐明其合理性还是一个亟待解决的问题。药学研究工作者已在这方面作了很多有益的探索，取得了很大的进展。本研究采用 HPLC／PDA，对黄药子配伍当归合煎液与单煎混合液中的阿魏酸和黄独乙素2个主要成分进行含量测定，从一个侧面探讨黄药子配伍当归的科学性。

l仪器与试药

1．1仪器

    Waters 2695 Separation Module HPLC(美国，Waters公司)；Waters 2996 PDA紫外检测器(美国，Waters公司)含在线真空脱气机、高压二元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱；Empower 2色谱管理系统；KO一500DB型数控超声清洗仪(江苏，昆山超声仪器有限公司)；梅特勒Toledo AGl35电子天平(瑞士，Mettler公司)； GLYZ—O．5B型冷冻干燥机(上海，浦东冷冻干燥设备有限公司)。

1．2试剂

色谱甲醇(中国，DIKAM公司)；色谱用水为娃哈哈纯净水(中国，娃哈哈公司)；分析级乙酸(天津，科密欧化学试剂公司)；实验所用其他试剂均为分析级。

1．3药品

阿魏酸对照品均购自中国药品生物制品检定所；黄独乙素对照品为自制，归一化法计算其纯度均大于99％；黄药子购于黑龙江省药材公司，产地河北，为薯蓣科植物黄独(Dioscorea bulbifera L．)的块茎；当归购于黑龙江省药材公司，产地安徽，为伞形科(Umbelliferae)当归(Angelica sinensis Diels)的根。上述生药鉴定均由黑龙江中医药大学刘树民教授完成。

2色谱条件

  色谱柱：Kromasil C18柱(250 min×4．6 mm．5μm)；流动相：0．1％乙酸水(B)与甲醇溶液(A)；梯度洗脱：0～50 min(0—17％A)，50～90 min(17％～40％A)，90～115 min(40％～80％A)，115～135min(80％～100％A)，135～145 min(100％A)；流速：0．8 ml。min；检测波长：300 nm；柱温：30℃；进样量为10μl．

3溶液制备

3．1一对照品储备溶液

  精密称取阿魏酸对照品适量，加70％甲醇配成625μg·mL的对照品储备溶液。精密称取黄独乙素对照品适量，加甲醇配成125／~g·mL的对照品储备溶液。 

  3．2样品溶液

3．2．1黄药子配伍当归合煎液

  黄药子配伍当归(1：2)饮片头煎10倍量水，浸泡2h后，煎煮lh，二煎8倍量水，煎煮lh，合并煎液，浓缩，超速离心机8000转离心3h，继续浓缩至每毫升含生药材0．5g，冷冻干燥制成粉末，加70％甲醇分别定容于25mL量瓶内，即为黄药子配伍当归合煎液样品。3．2．2黄药子配伍当归单煎混合液

  分别精密称取与“3．2．1”项下等量的2味药材，然后分别按“3．2．1”项下方法提取，将各单味药的提取液合并冷冻干燥制成粉末，加70％甲醇分别定容于25mL量瓶内，即为黄药子配伍当归单煎混合液。

4线性关系考察

  分别精密吸取“3．1”项下不同体积的2种对照品储备溶液(阿魏酸40，80，120，160，200，240，280t-tL)，置于2mL棕色量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，配制对照品的混合溶液，进样10mL；黄独乙素(80，100，140，160,180~L)置于2mL棕色量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，配制对照品的混合溶液，应用HPLC进行测定。色谱图。以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标绘制标准曲线，并进行线性回

归，得阿魏酸和黄独乙素的回归方程分别Y=33．56X+5．957    r=0．9997

    Y=77．14X一8．08    r=0．9995

线性范围分别10．95-74．35t-tg·mL和5．000-11．25p．g·mL～，最低检测限定义为信噪比(S／N)为3：1时的最低检出阿魏酸和黄独乙素的最低检测限分别为13和11,ug·mL～。

5方法学考察

5．1精密度试验

配制3个浓度的对照品混合溶液(阿魏酸：10，40，60,ug·mL；黄独乙素：5．000，8．750，11．25μg·mL)，进样量为10μl，连续进样6次，第l，2，3，4天内同法测定，每天重复进样4次。阿魏酸和黄独乙素日内RSl3分别小于1．4％，1．8％；日间RSD分别小于4．7％，2．4％。

5．2稳定性试验

取黄药子配伍当归合煎样品溶液，分别于第0，2，4，6，9，12h进样测定，结果阿魏酸和黄独乙素这2个成分峰面积的平均值分别为l 527．5和465．9；RSD分别为2．9％、1．6％，表明在12h内基本稳定。

5．3重复性试验

按“3．2”项下方法制备5份合煎液的样品溶液，分别按测定条件进样3次，阿魏酸和黄独乙素含量RSD分别为3．4％，2．6％。

5．4回收率试验

按“3．2．1”项下取2味药材，除1份作为对照组外，其余3份分别精密加入各对照品储备溶液50μl，按“3．2．1”项下方法制备所需溶液，进行回收率测定。结果表明，阿魏酸和黄独乙素回收率分别为101．7％，102．6％；RSD分别为1．8％和1．9％，符合含量测定的要求。

6样品测定

    取“3．2”项下制备的样品溶液，按“2”项下条件进样测定，根据2个成分的线性回归方程，对黄药子配伍当归合煎液与单煎混合液中的成分含量进行计算。

7讨论

7．1为选择最佳检测波长，以使2个成分能够同时被检出，我们采用HPLC／PDA检测，结果在280nm下黄独乙素有最大吸收峰，322nm下阿魏酸有最大吸收，为使所有峰均能检出，故选择300nm为测定波长。

7．2由于要同时测定的2个成分极性差异很大，采用等度洗脱难以达到有效分离。经过反复摸索，选择甲醇一水系统，采用梯度洗脱法，并在流动相中加人少量的乙酸以改善色谱峰的峰形和分离度。

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