止痛化分散片质量标准研究

    止痛化徽分散片是在止痛化徽胶囊的基础上，通过改变剂型制得的分散片。本制剂由党参、黄芪(炙)、白术、丹参、当归、鸡血藤、三棱等19味中药经提取加工制成。为保证临床用药安全有效，严格控制本品的质量，我们参考文献[2—3]，采用薄层色谱法对延胡索、黄芪、川楝子进行了定性鉴别，应用HPLC法测定丹参中丹参素的含量。

1仪器与药品

高效液相色谱仪(uV200 II，大连依利特科学仪器有限公司)；电子天平(AL204，梅特勒一托利多上海称重设备公司)；硅胶G薄层板(自制，硅胶G由青岛海洋化工有限公司制造，为化学纯)。丹参素钠对照品(批号855-200202，为含量测定用)、黄芪甲苷对照品、延胡索乙素对照品、川楝子对照药材由中国药品生物制品检定所提供；阴性样品(按处方药味去除被测成分，其余药味按制剂的制备工艺制得)。含量测定所用的甲醇为色谱纯，其它所用试剂均为分析纯。

2定性分析

2．1黄芪的薄层色谱鉴别

    取本品20片，研细，取9 g，加甲醇50mL，超声处理30min．滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30 mL，合并正丁醇液；加氨试液3倍量，摇匀，放置分层，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 ML使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每l ML含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液5 ug、对照品溶液2 μg，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲醇一水(13：7：2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑

2．2延胡索的薄层色谱鉴别

    取本品15片，研细，取6 g，加浓氨试液3 InL及三氯40ⅡlL，摇匀，放置1 h，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对加甲醇溶解，制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部： VIB]试验，吸取上述两种溶液各2～3μL，分别点于同一氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以正己烷一三氯甲醇(7．5：4：1)为展开剂，置预饱和的展开缸内，展开，取干，置碘蒸汽中熏至斑点清晰，取出，在空气中挥尽板上吸碘后，置紫外光灯(365 nfll)下检视。供试品色谱中，在与对色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2．3川楝子的薄层色谱鉴别

    取本品20片，研细，取10 g，加乙醇30 I『IL超声处理30滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液取川楝子对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄压法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录VIB]试吸取上述2种溶液各4 μL，分别点于同一以0．3％羧甲基纤钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯一丙酮(9：1)为展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点清晰。供试品色试

在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3定量分析

3．1对照品溶液的制备

  取丹参素钠对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每l mL含o．3 mg的溶液(相当于每1 mL含丹参素0．27 mg)，即得。

3．2供试品溶液的制备

  取本品20片，研细，精密称取约10 g，精密加入1％盐酸一甲醇溶液(50：50)50 mL，称定重量，超声处理(功率200 w，频率40 kHz)30 min，放冷，称定重量，用上述盐酸一甲醇溶液补足减失的重量，过O．45μm滤膜，即得。3．3阴性液的制备

  取除去丹参以外的其它药材，按供试品溶液制备方法制成阴性液。3．4色谱条件与系统适用性试验

  色谱柱：Diamonsil c18柱(250 mmX4．6 lIlIIl，5μm)，柱温为室温。流动相：甲醇一水一二甲基甲酰胺一冰醋酸(2：95：2：1)，流速1．0 mL／min。检测波长：281 nm。理论塔板数按丹参素峰计算不低于6000。在选定的色谱条件下，供试溶液中丹参素与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰。

3．5线性关系

  精密称取丹参素钠(以丹参素计)对照品30 mg，置10ML量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取上述溶液0．6、0．8、1．0、1．2、1．4 IIlL，置10 I『IL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程Y=289．29X+648．26，r=0.999 8。结果表明．丹参素讲样量=在3．6～8．4μg范围内线性关系良好。

3．6最低检测限

取线性关系试验项下的3号溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取20μL注入液相色谱仪中，记录色谱图，按3倍信噪比S／N计，最低检测限为100 ng。

3．7定量限

取线性关系试验项下的3号溶液3 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图中，信噪比约为10：1，计算定量限约为300 ng。

3．8稳定性试验

精密吸取供试品溶液20μL，每隔2 h进样测定1次，共测定8 h，结果表叽RSD：2．1％，表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

3．9精密度试验

精密吸取对照品溶液20 μL，连续进样5次，结果其峰面积的RSD=1．28％，表明仪器有很好的精密度。

3．10重现性试验

照“3．2”项下制备6份供试品溶液，分别精密吸取20μL，按前述色谱条件进样分析，测定色谱峰面积，结果RSD=l·12％，表明本法重现性良好。

3．11回收率试验

    采用加样回收法。精密称取已知丹参素含量的供试品药粉，按“3．2”项下方法制备供试品溶液，再添加一定量的丹参素钠对照品溶液，按上述色谱条件测定。结果平均回收率为99·66％， RSD=1 60％。

3．12样品测定

为制定含量限度，制备供试品3批(20060310、20060311、20060312)。按上述测定方法，测定其中丹参素的含量。

根据上述测定结果，并参照止痛化徽[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)][1]，本品每片含丹参以丹参素(c15H24N20）计．不得少于O．2 mg。

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