抗癌平胶囊提取工艺的研究

    抗癌平丸是中国医科大学药学博士张国清依据其独创的“癌细胞饿死疗法”并结合中医传统理论，精心研制而成的抗肿瘤纯中药制剂，由半枝莲、白花蛇舌草、珍珠菜、藤梨根、肿节风、香茶菜、蛇莓、石上柏、蟾酥等10味中药组成，具有清热解毒、散瘀止痛的功效，经大量临床应用验证，抗癌平对抑制癌细胞的转移及扩散，提高机体免疫功能，保护造血系统的有效率为86％，广泛应用于因热毒瘀血壅滞所致的食管癌、胃癌、直肠癌等消化系统肿瘤的治疗，对缓解病情，改善症状，提高生存质量，延长生命，疗效显著。并适用于放、化疗后引起的严重胃肠道反应，如恶心、呕吐及吞咽困难等，对年老、体弱、晚期转移癌等不宜手术治疗或放化疗的病人尤其适用。

抗癌平目前只有丸剂单一剂型销售，且原标准提取工艺中部分技术参数不明确，缺乏具体的质量控制指标，且服用不方便。为提高药物质量标准，方便质量控制，在原剂型工艺基础上，对抗癌平胶囊的提取工艺进行了研究，采用正交试验法，以半枝莲主要成分之一野黄芩苷的含量及干浸膏得率作为评价指标，对抗癌平中的半枝莲等药物水提取工艺的加水倍数、提取时间、提取次数等进行考察，优化提取工艺。

 1  材料

1．1  试剂  甲醇、石油醚、冰醋酸，以上均为分析纯；乙腈，为色谱纯；重蒸水。野黄芩苷对照品：购自中国药品生物制品检定所，批号：110842—200102。

1．2  药材半枝莲、白花蛇舌草、珍珠莱、藤梨根、肿节风、香茶菜、蛇莓、石上柏等均由上海悦胜芜湖药业有限公司提供，经鉴定符合《中国药典》2005年版规定。

1．3 仪器LC一10ATvp高效液相色谱仪：日本岛津公司。 SPD-10A紫外检测器：日本岛律。LC—IOAT泵；Shim--packODS色谱柱(4．6mm×250mm；5чm)；浙江大学N2000色谱工作站。

2  方法与结果

2．1 野黄芩苷的含量测定

2．1．1 色谱条件色谱柱：ODSC~8柱(250mm×4．6mm)；柱温：25℃；流动相：乙腈－水－冰醋酸(14：82：4)：检测波长为335nm。

2．1．2 对照品贮备溶液的制备精密称取在105℃干燥至恒重的野黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0．040mg的溶液，作为对照品贮备溶液。

2．1．3标准曲线的绘制  在上述色谱条件下，精密吸取对照品贮备溶液(0．040mg／m1)各4μl、6μl、11μl、16μl、20μl注入色谱仪，测定峰面积，以进样量(×10^-1μ)为横坐标(x)，峰面积积分值为纵坐标(Y)，经数据回归处理，得回归方程为：v=331365x+159568(r=0．9998 n=5)。表明：野黄芩苷在0．16～O．80pg的范围内线性关系良好。

2．2  样品的测定

2．2．1  对照品溶液的制备精密称取在105℃干燥至恒重的野黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0．020mg的溶液，即得。

2．2．2  供试品溶液的制备药材供试品溶液的制备：取半枝莲药材粉末(过3号筛)1．0g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)120ml提取至无色，弃去醚液，药渣挥去石油醚，加甲醇90ml继续提取至无色，转移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取25ml，蒸干，残渣用20％甲醇溶解，并转移至25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0．5μm)滤过，即得。

浸膏供试品溶液的制备：取干浸膏粉末1．Og，精密称定，加甲醇90ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用甲醇洗涤滤器及滤渣，洗涤液并人同一量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取25ml，置水浴上蒸干，残渣加水30ml使溶解，通过已处理好的聚酰胺柱(80～100目，2．Og，内径1．8cm，湿法装柱)，用水120ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇一水一氨水(80：19：1)80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，并转移至100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2．2．3  样品测定分别精密吸取对照品溶液、药材供试品溶液与浸膏供试品溶液各20μl，注入色谱仪，在上述色谱条件下进行测定，按外标法，以峰面积计算野黄芩苷含量，即得。

2．3  提取工艺的选择

2．3．1  吸水因子的考察  因处方中全草类药材较多、较蓬松，吸水易膨胀，故应考察处方的吸水因子。除蟾酥外，其余药材各称取1／100的处方量，共3组，加水适量浸泡至药材透心，沥干水分，称重，计算，即得。3组药材的吸水因子分别为2．2、2．1、2．2。    

2．3．2  半枝莲原药材中的野黄芩苷的含量测定  为考察提取过程中的野黄芩苷的含量转化率情况，按上述野黄芩苷含量测定方法对原药材中的含量进行了测定，结果见表l。

表1    半枝莲药材的野黄芩苷含量

2. 3．3  正交试验设计

正交试验方法：选取加水倍量(A)、提取时间(B)、提取次数(c)为考察因素，以出膏率、干浸膏中野黄芩苷的含量为评价指标，选取L₉(3⁴)正交表进行试验。因素与水平：按表3正交试验表进行试验，除蟾酥、百草霜外，称取1／25处方药味，加水适量浸泡0．5小时，加水煎煮，水煎液滤过，合并滤液，浓缩，减压干燥，得干浸膏，分别称重。

2．3．4  实验结果实验因素水平见表2。提取干膏得率设计表及结果见表3。提取物中野黄芩苷含量变化设计表及结果见表4。方差分析见表5~6。

表2    正交试验因素与水平

表3    提取干膏得率L₉(3⁴)正交试验表

表4    提取干膏中野黄芩苷含量变化L₉(3⁴)正交试验表

表5    提取干膏得率方差分析表

F_0.05(2,6)=19．00 F_0.01(2，2)=99．00

表6    干膏中野黄芩苷含量方差分析表

F_0.05(2，6)=5．143

讨论由正交试验分析结果表得知：以干浸膏率为指标，因素影响力依次为：c>A>B，其中c有显著性差异(P<0．05)，最佳水平组合为A₃B₂C₂，即加 12倍量水煎煮2次，每次2．0小时。以干浸膏中野黄芩苷含量为指标，因素影响力依次为：C>B>A，其中c有显著性差异(P<O．05)，最佳水平组合为A₂B₂C₂，即加10倍量水煎煮2次，每次2．0小时。

    根据干浸膏得率和干膏中野黄芩苷含量综合分析，考虑实际操作，确定最佳水平组合为A₂B₂C₂，即加10倍量水提取两次，每次2．0小时。

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