中药和针药结合对慢性肾衰的干预研究

观察活血扶正中药（抗纤灵2号）及结合外治针刺法对早、中期慢性肾衰伴大量蛋白尿患者的临床疗效，探讨其对血脂、血液动力学、氧化——抗氧化系统的影响机制及其与血瘀病理状态的关系；建立慢性肾衰（CRF）大鼠大量蛋白尿模型，研究高蛋白饮食及大量蛋白尿加重早中期CRF影响的机理，阐明抗纤灵2号对有大量蛋白尿的CRF动物进行干预的药效学及临床疗效机理。此项研究方法如下：
　　1．临床研究  选择早、中期慢性肾衰伴大量蛋白尿患者82例，随机分为对照组（25例）、中药组（27例）和针药结合组（30例），分别予福辛普利、抗纤灵2号、针刺配合内服抗纤灵2号治疗，疗程2月。观察治疗前后肾功能、血常规、24h尿蛋白定量、GFR等指标的变化及临床血瘀症状的变化。
　　2．动物实验  给予5/6肾切除大鼠不同蛋白饮食喂养，建立CRF大鼠伴有大量蛋白尿模型，应用血液及组织的生化测定、放射免疫法测定、化学比色法、免疫组织化学、RT-PCR等技术，从血液动力学、血管活性物质、一氧化氮及合酶系统、氧化--抗氧化系统、细胞因子分泌、血脂代谢及肾脏病理等方面，研究高蛋白饮食及大量蛋白尿加重早中期CRF进展的机理及抗纤灵2号干预早中期CRF大量蛋白尿的药效学机理，并对其复方中单味药丹参、黄芪作平行观察。
　　3．体外研究  观察抗纤灵2号含药血清对毒素血清和肿瘤坏死因子α（TNFα）刺激的肾小管上皮细胞分泌转化生长因子βmRNA（TGF-βmRNA）表达的影响，和对肾小球系膜细胞分泌的TNFα、血小板转化生长因子mRNA（PDGFmRNA）表达及肾细胞外间质（ECM）的影响。
　　临床研究表明，抗纤灵2号方结合针刺能明显改善CRF伴大量蛋白尿患者的临床血瘀症状和肾功能，降低尿蛋白，总有效率为86.67%，中药组有效率为51.85%，临床总体疗效优于对照组。
　　给予5/6肾切除大鼠高蛋白饮食，可诱导建立CRF大鼠大量蛋白尿模型；高蛋白饮食及大量蛋白尿可通过加重CRF大鼠的血液动力学异常（升高血栓素B2、内皮素，降低血6-酮-前列腺素F1α、一氧化氮和一氧化氮合酶），血脂（胆固醇及低密度脂蛋白等）代谢异常，增加大鼠血清生长激素、胰岛素生长因子、肿瘤坏死因子的浓度，减弱大鼠血超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶的活性，增加血和组织丙二醛含量等环节，促使CRF进展恶化。抗纤灵2号可有效地干预上述高蛋白饮食及大量蛋白尿加重慢性肾衰的环节，抑制大鼠肾组织中纤维连接蛋白（FN）及TGF-βmRNA的表达和体外肾小管上皮细胞TGF-βmRNA和肾小球系膜细胞分泌的TNFα、PDGFmRNA的表达等作用，延缓慢性肾衰的进展。单味药丹参、生黄芪对本病也有不同程度的改善作用。
　　抗纤灵2号和抗纤灵2号合用针刺穴位能显著改善CRF伴大量蛋白尿患者的肾功能，降低尿蛋白，改善临床血瘀症状，具有抑制大量蛋白尿加重早、中期慢性肾衰的作用，延缓CRF进展。通过建立伴有大量蛋白尿的CRF大鼠模型，进一步验证抗纤灵2号的临床疗效，其延缓早中期慢性肾衰进展、减轻肾间质纤维化和肾小球硬化的机理与抑制加重CRF进展的恶化因素，如降低蛋白尿、调节血脂代谢紊乱、一氧化氮及合成酶系统和肾脏血管活性物质代谢、提高机体抗氧化能力及抑制过度表达的细胞生长因子对肾组织的损害等作用有关。
　　本项目研究创新点有如下几方面：
　　1．根据伴大量蛋白尿的慢性肾衰患者正虚（脾肾气阳虚）血瘀并重的病机特点创制扶正活血方药抗纤灵2号方。中医认为“久病入络”、“久病必瘀”，CRF是多种原发病或继发性肾脏病持续进展的共同结果，肾病日久，脾肾气血亏虚，气机不畅，气滞血瘀，络脉阻滞。瘀血贯穿于慢性肾功能衰竭的始终，确立了扶正活血的治疗原则。采用扶正活血中药抗纤灵2号方（丹参、黄芪、桃仁、牛膝、大黄、仙灵脾）。全方以补气活血为主，兼以扶正泻浊，攻补兼施，温凉并用，使泻而不伤正，补而不滞邪。
　　2．建立伴大量蛋白尿的慢性肾衰动物模型。大量临床及实验研究发现，蛋白尿不仅是多种急慢性肾脏疾病的一个主要临床表现，而且是肾小球疾病患者潜在的病情恶化最危险的相关独立因素之一。大量蛋白尿对肾脏具有直接损伤作用，可以使原有的肾小球损害逐渐加重，促使肾小球硬化的发生。因此，临床上伴有大量蛋白尿早中期CRF患者其肾衰进展的速度要快于蛋白尿少的患者。因此作为慢性肾衰加重的最主要的诱发因素之一——大量蛋白尿，目前还缺少有效的治疗方法。本研究给予经典的5/6肾切除CRF动物模型大鼠高蛋白饮食（普通饮食加40%蛋白），成功诱导出有大量蛋白尿的CRF模型。
　　3．应用中医内外同治的方法，针药结合，以提高临床疗效。我们在抗纤灵2号方治疗的基础上加用针刺穴位，根据针灸治疗“辨证施治”、“循经取穴”的宗旨，采用健脾补肾，活血化瘀，扶阳而助气化，运湿而泄水浊之法取穴，进一步提高临床疗效，减少毒副作用。
　　4．大量蛋白尿加重慢性肾衰进展机理的研究和活血扶正中药的干预作用。大量蛋白尿能够加重CRF大鼠的肾脏损害作用，而改善大量蛋白尿因素能够延缓肾脏病的进展。本研究从CRF大鼠肾功能及蛋白尿；血液动力学及血管活性物质，一氧化氮及其合成酶系统、氧化——抗氧化系统、细胞因子分泌、血脂代谢、光镜（HE、PAS染色）、电镜观察肾脏组织病理等方面，阐明了高蛋白饮食及大量蛋白尿加重早中期CRF影响的机理及抗纤灵2号方干预早中期CRF大量蛋白尿的药效学机理。
　　5．通过体外细胞培养，从细胞水平阐明了扶正活血中药改善肾脏纤维化，延缓肾功能的恶化的机理。观察慢性肾衰毒素血清、TNF-α及扶正活血药物血清对肾小管上皮细胞分泌FN、TNF-α和TGF-β1mRNA表达的影响；观察慢性肾衰毒素血清和扶正活血药物血清对肾小球系膜细胞TNF-α、PDGF表达及肾间质ECM的影响，从细胞水平阐明了扶正活血中药能够改善肾脏纤维化，延缓肾功能的恶化的机理。

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