五叶草莓乙醇提取物镇痛抗炎作用的实验研究

李巧兰 李 征 杨 轶 李 斌 何谨瑜 指导：张 红 (陕西中医学院，陕西咸阳712046) 五叶草莓(又名泡儿、栽秧泡)属蔷薇科草莓属多年生草本植物，是秦岭山区的一种野生植物，当地群众采集白色成熟果实大量食用或酿酒，当地民间草医用其全草煎服治疗胃脘不适极有效验。我们根据民间应用经验，将其全草经过浸泡煎煮后采用常规乙醇提取方法得到其乙醇提取物，在前期毒理实验的基础上对其进行镇痛、抗炎作用的研究，为进一步开发应用五叶草莓提供依据。 1 实验材料 1．1 动物 ICR小鼠，雌雄各半，体重18g~22g；SD大鼠，雌雄各半，体重130g~150g，均由陕西省中医研究院动物实验中心提供(动物合格证号陕动字08~24) 1．2 药物 五叶草莓全草(釆自秦岭山区，以下简称WYCM)：经水煎，过滤浓缩至5 g生药／ml，用生理盐水配制成高剂量(含生药90meCml)、中剂量(含生药45mg/ml)、低剂量(含生药22．5mg/ml)备用；哌替啶吉林制药股份有限公司生产，批号050312；阿司匹林西南药业股份公司，批号050401。 1．3 试剂 冰醋酸：河南开封化工厂生产，批号20040905；二甲苯：西安化工厂生产，批号20050629。 1．4 仪器 YLS一6A智能热板仪：山东省医学科学院设备站；FAl004N型电子天平：上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂；机械秒表(钻石牌)：上海市钟表工业公司上海秒表厂；游标卡尺：上海研润光机科技有限公司。 2 实验方法 2．1 小鼠热板实验 取雌性ICR小鼠，调节恒温水浴水温(55±O．5)℃，预热10min后，将小鼠置热板上至出现舔后足所需时间为该小鼠痛阈值。选用痛阈值5~30s小鼠50只，随机分为WYCM高剂量组、中剂量组、低剂量组、哌替啶组及空白组，每组10只，各小鼠测2次痛阈值，取均值作为基础痛阈值。其中WYCM高、中、低剂量组分别依次ig3．6g/kg 1.8g/kg O.9/kg的WYCM提取物，空白组)2等体积生理盐水，给药容量均为O．2ml／10g体重，连续7d，末次给药后哌替啶组给予ip 0．1％的盐酸哌替啶O．1ml／lOg，分别测给药后30、60、90、120min的痛阈。 2．2 小鼠扭体实验 取ICR小鼠50只，雌雄各半，随机分为WYCM高、中、低剂量组。哌替啶组和空白组，每组10只。各组实验小鼠给药方式同2．1。末次给药30rain后，腹腔注射0．9％醋酸O．1ml／10rag。哌替啶组在i．p哌替啶10min后i.p同量醋酸，观察各组动物10min内扭体次数。 2．3 小鼠耳肿胀实验 取ICR小鼠50只，雌雄各半，随机分为wYCM高、中、低剂量组。阿司匹林组和空白组，每组10只。WYCM各组及空白组给药同2．1，阿司匹林组于末次给药时ip 0．1ml／10g阿司匹林。WYCM各组于末次灌胃30min后，阿司匹林组于给药10min后在每只小鼠左耳均匀涂二甲苯O．05mI致炎，右耳为空白。4h后，小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下双耳，用直径8mm打孔器取双侧对称处的耳片称重，以其重量差为肿胀指标。 2．4 大鼠蛋清致足肿胀实验 取S0大鼠50只，随机分为WYCM高、中、低剂量组，阿司匹林组及空白组，每组1O只，WYCM高、中、低剂量组分别依次ig 4g/kg 2g/kg 1g/kg WYCM 提取物，空白组ig等体积生理盐水，给药容量均为2ml／100g，阿司匹林组给O．7ml／100g，连续7d。末次给药后1h将鲜蛋清注入大鼠右踝关节皮下(0．1 ml／只)，3h后用卡尺测量踝关节周长之差为指标，用左右踝关节肿胀之差计算肿胀程度。 2．5 大鼠棉球性肉芽肿实验 取5D大鼠40只，在乙醚吸人浅麻醉无菌条件下，于两侧腹部皮下各植入30mg灭菌棉球1个，外涂青霉素溶液防止感染。手术后随机分为WYCM高、中、低剂量组。阿司匹林组及空白组，每组10只，给药同2．4。末次给药后处死动物，打开原切口，剥离棉球肉芽组织，用滤纸吸干，放在称质量纸上称质量，所得质量减去纸的质量，净得肉芽质量。计算肉芽重量并计算抑制率。 3统计学处理 数据以均数±标准差表示，应用SPSS一10．O统计软件进行方差分析。 4 结果 4．1 小鼠热板实验 结果提示：高、中、低五叶草莓提取物对热板法致痛小鼠的痛阈值均有明显的提高作用，随着给药后时间的延长痛阈值亦增加，但作用逊于哌替啶组，见表l。 4．2 小鼠扭体实验 结果提示：高 中 低五叶草莓提取物对醋酸引起的小鼠扭体反应均有明显的抑制作用，见表2。 4．3 小鼠耳肿胀实验 结果提示：高、中、低剂量 五叶草莓提取物均能明显对抗二甲苯所致小耳肿 胀作用，见表3。 4．4 大鼠鸡蛋清致足肿胀实验 结果提示：高、中、低剂量五叶草莓提取物对大鼠蛋清性足肿胀均有明显的抑制作用，从致炎后1h开始对蛋清所致足肿胀起抑制作用，并且在炎症达到高峰期后随着时间的增加抑制作用增强，见表4。 4．5 大鼠棉球性肉芽肿实验 结果提示：高 中 低剂量五叶草莓提取物对大鼠棉球性肉芽肿均有显著的抑制作用，见表5。 5 讨论 秦岭山区五叶草莓分布较广，民间使用疗效确切，尤其在治疗胃脘痛，前列腺炎等方面均有显著疗效。本实验证明五叶草莓提取物有明显的镇痛作用，采用小鼠热板法和扭体法两种疼痛模型，实验可见小鼠因热刺激致痛的痛阈值明显提高，扭体 反应次数明显减少，但稍逊于哌替啶。在抗炎方面，对二甲苯所致的小鼠耳壳肿胀，大鼠蛋清性足肿胀及大鼠棉球性肉芽肿均有显著的抑制作用，并与药物剂量程正相关性。我们的研究结果显示其乙醇提取物含有较为稳定的药物活性成分，对动物疼痛和炎症模型表现出显著的抑制作用。此初步研究对五叶草莓临床合理应用具有一定的指导作用，其镇痛抗炎机理及有效成分还有待于进一步研究。

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