晋产远志种质资源皂苷元含量测定

赵云生 李占林 张丽萍 (山西省农科院经济作物研究所 汾阳 032200)严铸-X- (成都中医药大学药学院 成都 610075，毛彳鬲英 (山西省汾阳市疾控中心 汾阳 032200) 远志始载于《神农本草经》，为远志科植物远志(Polygala tenu ifoJiD Willd)和卵叶远志(P．sibirical L)的干燥根，具有安神益智，祛痰，消肿的作用，是我国85种传统出口药材之一，也是国家42种重点保护的三级野生品种之一11I，为山西著名道地药材。远志皂苷为远志镇静、祛痰、利尿、降压等功效的主要活性成分，本文采用远志皂苷元为对照品，对晋产远志种质资源进行了初步研究。 一、仪器与试剂 仪器：日本岛津u-IOA了VP高效液相色谱仪，SPD-10AVP紫外检测器：浙江大学N2000色谱数据工作站。电子天平(Made bY Sartorius BPl21S)。 试剂：甲醇。乙腈为色谱纯；乙醚、36％乙酸等均为分析纯；水为重蒸水。 远志皂苷元对照品，供含量测定用(中国药品生物制品检定所，批号：111572-200301)。 药材：由笔者根据山西农业区划C2)所划分气候区征集，每区征集l份，共12份野生资源，由南向北依次编号；其余2份选用我所自选品系(表3)。 二、测定参数的选择 1．色谱条件的选择 (1)色谱柱：采用18烷基硅烷键合硅胶柱DikmaTechnologiceC18(5 μm，250 mmx4．6 mm)。 (2)检测波长的选择：取远志皂苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成对照品溶液。在200-400nm扫描发现，远志皂苷元在210 nm吸光度最大．故选210 am为本实验检測波长。 (3)流动相的选择：参照有关文献，考察甲醇一水一磷酸、乙腈一水一乙酸等流动相，最后发现甲醇一水一磷酸流动相基线不平稳，改用乙腈一水一乙酸(49：51：0．5)作流动相，可使远志皂苷元与杂质峰达到基线分离，且峰形对称、理论塔板系数为9695．拖尾因子为0．896-0．934。 (4)流速：I mL／min；柱温：室温： (5)进样量3 ixL，标准品及样品色谱图见图1、2。 2．样品液的制备 参照文献方法，称取60℃下干燥至恒重的远志粉末(4号筛)约2 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚100 mL(30-60℃)，回流1 h，取出，药渣挥尽乙醚后，再以甲醇100 mL加热回流提取4 h．减压浓缩提取液，回收甲醇至干，得远志总皂苷。加10％盐酸10 mL使之溶解，并转入锥形瓶中，沸水浴回流2 h，过滤得褐色沉淀，将沉淀以蒸馏水洗至中性，用甲醇少量多次洗滤纸。使沉淀溶解于25mL容量瓶中，用甲醇定容即得样品溶液。 3．对照品溶液的制备 精密称取远志皂苷元对照品5．1 mg．置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得(每1 mL含远志皂苷元0．51 mg)。 4．标准曲线的制备 分别取对照品溶液进样1．0，2．0，5．0，8．0和10．0μL，以对照品的质量为横坐标，峰面积为纵坐标。绘制标准曲线，经回归处理，得回归方程：y=119044x+2600．1，r=0．9995，说明远志皂苷元在0．51—5．1μg与峰面积呈良好的线性关系。 5．精密度试验 精密吸取同一远志供试品溶液．连续进样5次，每次3 μL，测定峰面积，计算远志皂苷元含量，测定结果分别为：1．044％、1．080％、1．025％、1．098％、1．062％，RSD为2．7％，可见该方法精密度较好。 6．稳定性试验 取同一远志药材供试液，室温放置，在上述色谱条件下，每隔2 h进样1次，每次3 IxL，测定峰面积，计算远志皂苷元含量，共考察8 h，测定结果分别为：1．002％、0．930％、0．913％、0．929％、0．965％。RSD为3．8％(n=5)，可见远志药材供试液室温下放置．8 h内不影响含量测定结果。 7．重现性试验 精密称取同一样品5份，分别按供试品溶液制备方法制得供试品溶液，依法测定远志皂苷元含量，测定结果分别为：0．890％、0．955％、0．966％、0．901％、0．955％，RSD为3．7％，可见运用本法测定含量，重现性较好。 8。加样回收率试验 精密称取已知含量的远志药材粗粉各2．5 g，共5份，精密加入远志皂苷元对照品溶液(浓度为0．51mg／mL)3 mL，按供试品溶液制备方法制得供试液，依法测定其远志皂苷元的含量。按下式计算回收率： A：样品所含被测成分量；B：加入对照品量；C：实测值 测定结果分别为：101．286％、103．599％、99．614％、95．954％、103．252％，RSD=3。1％(n=5)，平均回收率为100．741％。 9．样品测定 按样品液制备项下方法制备各供试液．进样3μL，依法测定，测定结果见表1。 三、结果与分析 由表2可知：山西不同气候区野生远志皂苷元含量在山西地貌中段的太原盆地、上党盆地、晋西丘陵、河保兴丘陵与晋东低山丘陵气候区含量较高，其中以上党气候区皂苷元含量最高，含量达1．118％；以恒山、五台山气候区含量最低，含量为0．624％，比上党气候区低0．49％。不同产地的远志药材中，我所自选品系“汾远l号”、“00-3—10-1”两个栽培品种中远志皂苷元含量均高于各气候区野生远志，“汾远1号”比上党气候区野生远志皂苷元含量还要高0．38％，而这两个品种间远志皂苷元含量差异不大，仅差0．061％。 从总体上而言，山西不同气候区野生远志以河保兴丘陵气候区兴县远志为界，向北各气候区野生远志皂苷元含量逐渐减少，向南到上党气候区为止．各气候区野生远志皂苷元含量逐渐升高。此外，“00-3-10-1”与“汾远1号”，这两个栽培品种的皂苷元含量明显高于各气候区野生远志。 四、讨 论 远志皂苷元的含量测定结果发现：不同产地的远志药材中，“00-3-10-1”与“汾远1号”两个栽培品种中远志皂苷元含量均高于各气候区野生远志。“汾远1号”比最高含量的野生远志皂苷元(上党气候区)还要高0．38％，而这两个品种间远志皂苷元含量差异不大。这可能是由于大田栽培改善了远志的生长环境条件。统一的采收与管理也有益于远志药材有效物质的形成与积累所致。另一方面也说明，将野生远志引种、驯化，由野生变家栽，是可行的。

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