高效液相色谱法测定复方葛根片中丹参酮ILA含量

彭学莲 ，耿晖 ，崔苏镇 (1．济南军区总医院，山东济南 250031； 2．山东省立医院，山东济南 250021) 复方葛根片由葛根、丹参等组成，笔者利用高效液相色谱法对 所含丹参酮IIA真进行了含量测定，以此作为质量控制指标。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪(美国Waters公司)，包括Waters 2487检测器，Waters600泵；BP211D型电子天平(德国sartorius)；tCQ一600DB型数控超声波清洗器。除高效液相色谱检测所用试剂为色谐纯外，其他试剂均为分析纯；双蒸水为自制。丹参酮nA对照品(批号为0766一200010，中国药品生物制品检定所)；复方葛根片(本院制剂室生产)。 2 方法与结果 2．1 色谱条件 色谱柱：AlltimaC18柱(250mm×4．6mm，5μm)；流动相：甲醇一水(85：15)；流速：1 mL／min；柱温：30％；检測波长：27(3 nm；进样量：20 μL。理论塔板数以丹参酮L峰计算为8 000。 2．2 溶液制备 精密称取丹参酮Ⅱ+对照品12 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，作为对照品溶液，备用。将复方葛根片除去糖衣，研细混匀，取适量精密称定，加甲醇9．5mL，超声提取10rain，用甲醇定容至10 mL，摇匀，再用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。 2．3 方法学考察 线性关系考察：精密吸取对照品溶液O．5，1，1．5，2，2．5 mL，分别置5 mL量瓶中，用甲醇定容。分别取20 μL注入高效液相色谱仪，以进样量(μg为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，求得回归方程r=1 187761X一3 857．9，r：o．9996。结果表明丹参酮ILA进样量在0．24-1．2μg范围内与峰面积有良好的线性关系。 精密度试验：精密吸取丹参酮IL对照品溶液(36μg／mL)20 μL，重复进样5次，记录峰面积。结果峰面积的RSD=1．1％。 重现性试验：取同一样品，按供试品溶液的制备方法制备5份待测溶液，分别进样20 μL，计算含量。结果的RSD=1．8％。 稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别在O，2，6，12 h时奋进样20μL记录峰面积。结果表明，丹参酮IIA在12 h内稳定。 加样回收试验：精密称取6份已知丹参酮L含量的样品，分别加入适量丹参酮L对照品，按供试品溶液的制备方法制备供试液。精密吸取20 μL进样，记录峰面积，并计算回收率。结果见表1。 阴性对照试验：按处方比例取除去丹参的处方药材，按复方葛根片的制备方法制成阴性对照片剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液，取20 μL进样。结表明，在丹参酮L相同的保留时间处无千扰，色谱图见图l。 2．4 样品含量测定取3批样品适量，依法测定。结果批号为001205，010615，OI1218的3批样品中丹参酮n真含量分别为2．0512,2．1217，2．0763mg／g(n=5)。 3 讨论 3．1 本法简便、快速、灵敏，可作为复方葛根片的 质量控制方法。 3．2 流动相的选择采用了药典方法，只是对比例进行了调整，这样使得保留时间缩短，样品分析更迅速。 3．3 样品的处理曾比较了回流提取与超声提取，结果两种提取方法的提取率相当，而超声提取的方法更简单。

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