烧伤涂膜剂质量标准研究

张秋红，李德平，张忠义 (南京军区南京总医院制剂科、南方医科大学南京临床学院，江苏南京 210002) 烧伤涂膜剂是我院自行研制的中药制剂，含有虎杖、黄芩等成分，主治深Ⅱ度、浅Ⅱ度烧伤。笔者探讨了该制剂的质量控制方法，报道如下。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪(美国Waters公司)，包括Waters 1525双泵，Waters 2996二级管阵列检测器，Waters Millenium32色谱工作站。虎杖、黄芩对照药材，大黄素对照品(批号为0756—200110)、黄芩苷对照品(批号为110715—200212)，由中国药品生物制品检定所提供；甲醇(色谱纯)，其余均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 薄层色谱(TLC)鉴别 2．1．1 虎杖：精密称取本品20 g，加水100 mL，加稀盐酸调节pH值为2，加乙酸乙酯30 mL，回流提取2 h，收集乙酸乙酯液，酸水层再用乙酸乙酯萃取2次，合并后挥干，残渣加甲醇2 mL溶解作为供试品溶液；精密称取大黄素对照品，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的对照品溶液；取虎杖对照药材3 g，加乙醇50 mL，水浴回流提取1 h，滤过，蒸干，残渣加水30 mL、盐酸3 mL，水浴回流30 min，用乙酸乙酯萃取3次，每次15 mL，合并萃取液，挥干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为对照药材溶液。按处方称取除虎杖外的其余药材制成涂膜剂，依供试品溶液的配制方法同法制成阴性对照溶液。吸取上述4种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶C薄层板上，以石油醚(30—60℃)一甲酸乙酯一甲酸(15：5：1)为展开剂展开，晾干。供试品溶液及对照药材溶液与对照品溶液色谱在相应位置上有相同的黄色斑点，而阴性对照溶液则无，证明有虎杖存在(图1 A)。 2．1．2 黄芩：精密称取本品20 g，加水100 mL，加稀盐酸调节PU值至2，加乙酸乙酯30 mL，水浴回流提取2 h，收集乙酸乙酯液，酸水层再用乙酸乙酯萃取2次，合并提取液，挥干，残渣加乙醇5 mE溶解，上14-30目聚酰胺柱，先用水洗脱至洗出液五色，再用80％乙醇洗脱，收集洗出液200mL，回收乙醇，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每l mL含0．5 mg的对照品溶液；取黄芩对照药材2 g，加乙醇50 mL，水浴回流提取l h，滤过，蒸干，残渣加水30 mL，加稀盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯萃取3次，每次15 mL，合并萃取液并挥干，残渣加乙醇5 mL溶解，上14-30目聚酰胺柱，先用水洗脱至洗出液无色，再用80％乙醇洗，收集洗出液200 mL，回收乙醇，残渣加甲醇2 mL溶解，作为对照药材溶液；按处方称取除黄芩外的其余药材制成涂膜剂，依供试品液的配制方法制成阴性对照品溶液。吸取上述4种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇一醋酸一水(4：2：1)为展开剂展开，晾干。日光下观察呈绿色，在紫外光灯(365 nm)下检视呈褐色．供试品溶液与对照药材溶液及对照品溶液色谱在相应位置上有相同斑点，而阴性对照溶液则无，证明有黄芩存在(图1 B)。 2．2 含量测定， 2．2．1 色谱条件：色谱柱为LichrospherCj。柱(150mm x4．6mm，5 μm)，流动相为甲醇-0．2％磷酸溶液(75：25)，检测波长为254 nm，流速为1．0 mL／min，进样量为lO μL。 2．2．2 溶液制备：方法同2．1．1项下方法。 2．2．3 系统适用性试验：吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液分别注入色谱仪，记录色谱 图(图2)。理论塔板数按大黄素计算大于4 000，大黄素峰与其他组分峰的分离度大于2，大黄素峰保留时间约为12．8 min，阴性对照品在此处无干扰峰，即本试验条件下大黄素峰与其他组分峰分离完全。 2．2．4 线性关系考察：精密吸取大黄素对照品溶液适量，加甲醇制成含大黄素0．5，0．4，0．3，0．2，0．1 mg／mL的系列溶液，在选定的色谱条件下，进样10 μL，记录色谱图。以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归，得线性方程A=3．18 x 107C+2．03 x 105(r=0．999 7)，可见大黄素浓度在0．1-0．5 mg／mL范围内与峰面积线性关系良好。 2．2．5 精密度试验：取同一对照品溶液，连续测定5次。结果的 RSD：0．13％。 2．2．6 稳定性试验：取同一供试品溶液，测定5次，每次间隔l h。结果的RSD：0．42％，表明供试品溶液在4 h内稳定。 2．2．7 重现性试验：取同一批号的样品，按供试品溶液的制备方法制备6份供试溶液，分别测定。结果的RSD：1．2％，表明方法重现性良好。 2．2．8 加样回收试验：精密称取2．2．7项下同批样品(批号为050608，含量为22．2 Ixg／g)10 g，共取6份，精密加入对照品溶液(0．1 mg／mL)1．5，2．0，3．omL各两份，水浴蒸干，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，最后蒸干的样品加甲醇定容至1 mL．分别测定并计算回收率。结果见表l。 2．2．9 样品含量测定：依法测定3批样品。结果批号为050415，050608，050819的3批样品中大黄素的含量分别为22．2，22．2，22．1μg／g。 3 讨论 3．1 虎杖的有效成分含蒽醌类化合物，主要有大黄素、大黄素一6一甲醚、大黄酚、大黄酸及蒽苷A和蒽苷B。虎杖根中含白藜芦醇及白藜芦醇苷(虎杖苷)两种化合物。在2005年版《中国药典(一部)》中，虎杖含量测定的指标成分为大黄素和虎杖苷。虎杖苷的含量测定不稳定，须避光操作，不宜以此作为指标成分。虎杖中大黄素也常被作为质量控制指标，故选择大黄素作为该制剂的质量控制指标。采用醇一水系统作为流动相，避免了缓冲溶液及泵对色谱柱的损害，加入少量的磷酸，可以在较短的时间内得到良好的峰形，缩短分离时间。

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