不同大孔树脂吸附虎杖白藜芦醇苷的研究

许汉林，孙芸，陈军，邵继征，熊利容 (湖北中医学院，湖北武汉 430061) 虎杖别名花斑竹，系蓼科属多年生草本植物Polygonum cuspi—datum Sieb．ct Zucc．的干燥根、茎。性味苦寒，具有祛风利湿、散瘀定痛、止咳化痰的作用。白藜芦醇苷作为其有效成分之一，具有强心扩血管、抑制血小板聚集、调节血脂、镇咳平喘、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种作用。因此研究大孔吸附树脂对白藜芦醇苷的吸附和解吸，就是为了更好地从虎杖中提取白藜芦醇苷。本研究旨在为虎杖的开发利用提供科学的工艺参数。 1 仪器与试剂 P680 HPLC(Dionex)，UVDl70检测器，Chromeleon色谱工作站(美国戴安)；了DL一5型离心机(上海安亭科学仪器厂)。虎杖饮片(湖北省药材公司)；白藜芦醇苷对照品(批号为111575—200301，中国药品生物制品检定所)；AB一8，H1020，D101，X一5树脂(天津南开化工厂)；HPDl00(河北沧州宝恩化工有限公司)；SP850，SP825树脂(日本三菱，购自北京慧德易有限责任公司)；其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 虎杖提取液 通过正交试验，以白藜芦醇苷的含量和干膏得率为指标，得最佳提取方法：称取一定量过筛粉碎的虎杖粗粉，加入12倍量70％乙醇，加热回流3次，每次2 h，所得滤液合并，减压浓缩、回收溶剂，至稠膏状，备用。 2．2 吸附母液制备 取适量上述稠膏，以20％的乙醇稀释，离心处理后取浓度为0．23 g／mL(相当于原药材)的上清液作为吸附母液。 2．3 分析方法 2．3．1 色谱条件：色谱柱为DiamaonsilTMC18柱(250 mm x4．6 mm，5 μm)，流动相为甲醇一水(40：60)，流速为l mL／min，检测波长为299 nm，柱温为室温(25℃)。 2．3．2 标准曲线制备：精密称取白藜芦醇苷对照品适量，以流动相定容，配制成浓度为0．098 mg／mL的溶液。精密吸取此溶液5 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，浓度为0．049 mg／mL。再精密吸取白藜芦醇苷对照品溶液(0．049 mg／mL)5 mL，置10 mL量瓶中，同法操作5次，配成浓度分别为O．098，O．049，0．0245，0．01225，0．006 125，0．003 062 5 mg／mL的对照品溶液。然后依次精密吸取20 μL注入液相色谱仪，以白藜芦醇苷浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为r=l 123．755x一0．187 04(r=0．999 9)，线性范围为3．062 5—98μg／mL。 2．3．3 精密度试验：精密吸取对照品溶液，重复进样5次。结果RSD为O．205％。 2．3．4 稳定性试验：吸取吸附母液，每隔2 h进样20 ILL，测定各峰面积值，共测定5次。结果的RSD为0．061 2％(n=5)，表明吸附母液在10h内稳定。 2．3．5 加样回收试验：精密吸取已知含量的吸附母液5 mL，分别加入白藜芦醇苷对照品溶液适量，依法测定，结果见表l。 2．4 树脂预处理 取SP850和SP825树脂，以5倍体积的乙醇冲洗至加入水中无浑浊，再用蒸馏水冲洗至无醇味，备用。将其余5种树脂先用丙酮在索氏提取器内提取至洗脱液蒸干后无残留物，再用蒸馏水洗至无丙酮味，备用。 2．5 静态吸附交换 准确称取7种不同型号的吸干其表面水分的活化处理树脂各6g，置100 mL具塞锥形瓶中，各加入吸附母液25 mL，置恒温(20℃)水浴箱中，每隔30 min振荡1 min(60次／min)，12 h后过滤，分别吸取滤液l mL，用HPLC法测定滤液和母液中白藜芦醇苷、含量。按下式计算吸附量和吸附率：吸附量：(母液浓度一滤液浓度x溶液体积／树脂量，吸附率(％)=(母液浓度一滤液浓度)／母液浓度x 100％．结果见表2。可见，H1020树脂的吸附量最大，达到了17．00 mg／g，吸附率为98．07％；其次为SP850和SP825树脂，吸附量分别为16．12 mg／g和15．8l mg／g，吸附率分别为93．29％和91．58％。 2．6 静态洗脱 将上述已吸附好的树脂，先用水洗至滤液五色，再加入50％乙醇25 mL，每隔30 min振荡l rain(60次／min)，静置5 h后过滤．取滤液1 mL测定其白藜芦醇苷含量，按下式计算解吸量和解吸率：解吸量：解吸后溶液浓度x溶液体积／树脂量，解吸率(％)：解吸量／吸附量x 100％。结果见表3。可见，树脂SP850的解吸量最大．达到了8．546 mg／g．解吸率为53 00%． 2.7 个同深度乙醇解吸 为了提高解吸率，选择吸附率在90％以上的3种树脂，又分别选用60％，75％，90％乙醇作为解吸液，结果见表4。可见，树脂SP850在90％的乙醇中解吸量最大，达到了11．12 mg／g，解吸率为78．49％。但在75％乙醇中的解吸量与在90％乙醇中的解吸量相差不大，且杂质较少，故选用75％的乙醇作为解吸液。 3 讨论 3．1 研究表明，SP850树脂对白藜芦醇苷具有吸附量大、易解吸等特点，优于其他几种大孔吸附树脂，是较理想的吸附剂。它对白藜芦醇苷的动态吸附解吸工艺还在进一步的研究之中，结果将另文发表。 3．2 白藜芦醇苷溶于热水而在冷水中不溶，易溶于乙醇。其溶解度易受温度的影响，若温度低则易在水中析出沉淀，在离心处理过程中损失太大，所以选用20％乙醇稀释稠膏，这样在离心过程中的损失低于10％，可以满足试验要求。 3 3 有文献报道，AB一8树脂对虎杖中白藜芦醇苷有较好的吸附性能，吸附量为25．8 mg／g。但本试验结果显示，以20％乙醇上样，AB一8树脂的吸附量仅为11.53 mg／g。究其原因，可能是醇浓度对树脂的吸附能力有影响，具体原因还有待于进一步研究。

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