桃红颗粒质量标准研究

胡惠平 (安徽省医学科学研究所，安徽合肥 230061) 桃红颗粒为中药六类创新药，由芍药、丹皮、益母草、生地、丹参等11味中药加工而成，具有活血化瘀、调经止血的功能。笔者建立了芍药、丹皮、益母草、生地、丹参的薄层色谱法(TLC法)，并采用高效液相色谱法(HPLC法)对制剂中的芍药、丹皮中主要成分芍药苷进行了含量测定，报道如下。 1 仪器与试药 Waters 600型高效液相色谱仪(美国Waters公司)，UV996型检测器。芍药苷对照品(批号为110736—200422)，丹皮酚对照品(批号为110707—200205)；盐酸水苏碱对照品(批号为l10712—200306)，5一羟甲基糠醛对照品(批号为111626—200301)，原儿茶醛对照品(批号为110810—200205)，均购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余为分析纯；桃红颗粒(批号为20040221，本所中试产品)。硅胶G(青岛海洋化工厂)。 2 方法与结果 2 1 薄层色谱鉴别 2．1．1 芍药：取本品10 g，加甲醇30 mL，超声提取15 min，滤过，滤液蒸干，加水25 mL溶解，放冷滤过。滤液以水饱和正丁醇萃取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇10mL使溶解，加于中性氧化铝柱上(100。200目，10 g，内径10一15 mm，湿法装柱)，用甲醇30 mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按供试品制备工艺制备不含芍药的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。另取芍药苷对照品，以甲醇制成每l mL含l mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC法[2000年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶C薄层板上，以氯仿一甲醇(5：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱则无相应斑点(图l A)。 2．1．2 丹皮：取本品10 g，加水60 mL，置电热套上蒸馏，收集馏出液约20 mL，馏出液以石油醚lO mL萃取两次，合并石油醚并挥干，残渣加甲醇l mL使溶解，作为供试品溶液。按供试品制备工艺制备不含丹皮的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1 mL含l mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC法[2000年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 IxL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷一醋酸乙酯(3：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱则无相应斑点(图1 B)。 2．1．3 益母草：取本品20 g，加水40 mL溶解，用稀盐酸调节pH值至l一2，滤过，滤液加至强酸性阳离子交换树脂柱[001 x7型(732)Na型，内径2em，柱长15em]上，以8mL／min的流速用水洗至流出液近似无色，弃去水液，再以2mL／min的速度，用2mol／L氨水溶液150mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。按供试品制备工艺制备不含益母草的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。另取盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC法 [2000年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照品溶液各15μL、对照品溶液10 IxL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇一盐酸一水(4：l：0．5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱则无相应斑点)。 2．1．4 生地：取本品10g，加沸水50 mL溶解，放冷，过滤，滤液加醋酸乙酯萃取2次，每次20 mL，分取醋酸乙酯层，合并加15 mL水洗涤，分取醋酸乙酯层，加无水硫酸钠干燥后置水浴上蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按供试品制备工艺制备不含生地的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。另取5一羟甲基糠醛对照品，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC法[2000年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一醋酸乙酯(1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4一二硝基苯肼乙醇试液，热风吹至斑点清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱则无相应斑点(图1 D)。 2．1．5 丹参：取本品10 g，加O．1 mol／L的盐酸溶液20 mL，搅拌使溶解，离心，取上清液，加乙醚萃取2次，每次20 mL，合并萃取液，挥干乙醚，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按供试品制备工艺制备不含丹参的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每l mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC法[2000年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述供试品及阴性对照品溶液l0 txL、对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一丙酮一甲醇(8：l：0．4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％三氯化铁乙醇溶液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱则无相应斑点(图l E)。 l．对照品溶滇 2．供试品溶液 3．对照药材溶液 4．阴性对照品溶液 A．芍药 B．丹皮 C．益母草 D．生地 E．丹参 图1 薄层色谱图 2．2 含量测定(HPLC法) 色谱条件：色谱柱为ODS柱(250 n'lln x4．6 mm，5 LLm)，流动相为甲醇一0．26％醋酸(28：72)，流速为1．0 mL／min，柱温为30℃，检测波长为230 nm。在此条件下芍药苷的分离效果好，供试品色谱中芍药苷保留时间与对照品一致，而阴性对照品无干扰。 测定方法：取本品研细，精密称取0．5 g，加甲醇20 mL，超声15 min溶解，放冷定容至25 mL，摇匀，用0．45μm滤膜滤过，作为供试品溶液。按处方组成取除赤芍、丹皮以外的药材及辅料，按制备工艺要求，制成不含赤芍、丹皮的颗粒剂，按供试品溶液制备方法，制成阴性对照品溶液。精密称取芍药苷对照品，以甲醇配成每1 mL含O．15 mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2，lO μL，供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪测定，外标两点法计算，即得。 系统适用性试验：取芍药苷对照品溶液注入液相色谱仪中，以芍药苷计算，结果理论塔板数为6 106，因此将其定为不少于3 000。取供试品溶液注入液相色谱仪中，结果供试品色谱图中芍药苷峰周围无其他吸收峰，分离度良好。 标准曲线制备：精密称取芍药苷对照品1．645 0 mg，甲醇溶解定容至10 mL，分别进样2，4，6，8，10，12 IxL，按上述色谱条件依法测得峰面积。以进样量与峰面积进行线性回归，得回归方程A=一23 694+1 126 979C，r：o．999 5，结果表明芍药苷进样量在 0．329．1．974μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。 重现性试验：取批号为20040221的样品6批，每批10袋，精密称定，研细，分别精密称取0．5 g，依法测定。结果的RSD：2．7％。 精密度试验：取芍药苷对照品溶液，连续进样，每次6μL，依法测定峰面积。结果的RSD：1．1％。 稳定性试验：取供试品溶液，依法在0，4，8，16，24 h时分别测定峰面积。结果的RSD：2．91％。 加样回收试验：取批号为20040221的样品(平均含量为3．3l mg／g)5份，每份分别加入对照品芍药苷适量，依法测定，结果见表l。 3 讨论 上述含量测定方法经方法学考察，均符合规定，具有操作简便、灵敏度高、重现性好等特点，可以作为控制本品质量的方法。

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