气血生颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定

潘小华，李召红 (重庆市忠县人民医院，重庆忠县 404300) 气血生颗粒是由人参、白术、茯苓、黄精等数味中药制成的复方制剂，具有健脾固本、益气生血的功效，主要用于治疗脾胃虚弱、气血生化乏源引起的气血两虚证。为了控制产品质量，笔者采用高效液相色谱一蒸发光散射检测器法(HPLC—EESD法)对方中君药人参的主要有效成分人参皂苷Rgl，人参皂苷Re进行了含量测定，效果满意。 1 仪器与试药 仪器：高效液相色谱仪(Model426pump，Model570autosampler)，蒸发光散射检测器(ELSD 2000)，Chromtek色谱工作站，美国Alhech公司；丁G332A型电光分析天平(0．01 mg)，上海天平仪器厂。 试药：乙腈为色谱纯(Fisher公司)；水为重蒸水(自制)；其他试剂均为分析纯；人参皂苷R真．对照品(批号为0703—200221，供含量测定用)，人参皂苷R．对照品(批号为0754—200214，供含量测定用)，均由中国药品生物制品检定所提供；气血生颗粒(自制，批 号为040801，040802，040803)。 2 方法与结果 2．1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：SymmetryC18柱(250mmx4．6mm,5 μm)；保护柱：SecurityGuardTM保护柱；流动相：乙腈一水(19：81)；流速：1．omL／min；柱温：30℃；ELSD参数：漂移管温度为110℃，气体流量为3．O L／min。理论塔板数按人参皂苷Rg峰计应不低于3 000。 2．2 溶液制备 分别精密称取干燥至恒重的人参皂苷R小人参皂苷R．对照品适量，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷RgI，人参皂苷Re均为O．5 mg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下的本品，研细，精密称取5 g，置索氏提取器中，加甲醇80 mL，回流提取4 h，提取液蒸干，残渣加正丁醇饱和的水25 mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次25 mL，合并正丁醇液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。按本品相同工艺制备缺人参的阴性样品，依供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。 2．3 测定方法 分别精密吸取人参皂苷R真1＼人参皂苷fL对照品溶液10，20 μL，供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，以外标两点法对数方程计算，即得。 2．4 方法学考察 阴性对照试验：分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，在上述色谱条件下进样测定，记录色谱图，结果见图1。可见供试品溶液中人参皂苷Rg1峰与人参皂苷Re峰及其他相邻峰间的分离良好(及s>1．5)，阴性样品对人参皂苷Rg及人参皂苷Re的测定无干扰． 线性关系考察：精密称取干燥至恒重的人参皂苷Rg1对照品5．08 mg、人参皂苷Re对照品5．01 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成每l mL含人参皂苷Rg1O．508 mg、人参皂苷Re0．501 mg的混合溶液。分别精密吸取该溶液2，5，10，15，20汕L，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(m，μg)自然对数为横坐标、峰面积(A)自然对数为纵坐标进行线性回归，得人参皂苷Rg1、人参皂苷Re回归方程分别为：lnA：1．599 6 lnm十10．370 7，r=0．999 5：lnA：1．5867 Inm十lO．255 9，r=O．999 3。人参皂苷Rgl，人参皂苷Re进样量的线性范围是1．016一lO．160μg和1．002一lO．020μg。因标准曲线不过原点，故每次测定时均平行测定两个不同进样量的标准品，以外标两点法对数方程计算即得。 精密度试验：精密吸取线性关系考察项下对照品溶液10μ1在上述色谱条件下连续重复进样5次，记录色谱峰面积。结果人参皂苷Rgl，人参皂苷Re峰面积的RSD分别为1．38％和1．68％。 重现[生试验：取同一批号样品(批号为040801)共5份，分别按拟定的含量测定方法测定。结果人参皂苷Rg1乎均含量为o．39 mg／gRSD为1．73％；人参皂苷n真平均含量为0．42mgLg，RSD为1．79％； 稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于o，4，8 h时注入液相 色谱仪，均进样20 IxL，记录色谱峰面积。结果人参皂苷Rsm、人参皂苷Re峰面积的RSD分别为1．03％和1．59％，表明供试品溶液d 8h内稳定性良好。 加样回收试验：精密称取已知含量的样品(批号为0408012．5日，共6份，分别精密加入对照品溶液(人参皂苷Rg1人参皂苷Re浓度分别为o．981，0．993 mg／mL)0．8，O．8，1．O，1．0，1．2，1．2mL按2．2项下供试品溶液的制备方法制备待测溶液，在拟定色谱 件下进行测定，计算回收率，结果见表1。2．5 样品含量测定 按拟定的含量测定方法对3批样品进行测定。结果批号为040801，040802，040803的3批样品中人参皂苷RcI＼人参皂苷R。的平均含量分别为o．39和0．42，O．37和o．4l，O．39和0．40 mg／g。 3 讨论 3．1 常用的人参皂苷Rsl＼人参皂苷R。的含量测定方法有薄层扫描法、HPLC法等，HPLC法除了用蒸发光散射检测器进行检测(ELSD法)外，主要使用紫外检测器在203 nm波长处检测。由于203 nm波长处为末端吸收，皂苷类成分紫外吸收较差，易受试剂影响，基线漂移大，而蒸发光散射检测器适用于紫外吸收较弱的不挥发性成分(如皂苷类等)的检测。 3 2 在供试品溶液的制备过程中，曾对提取方法、提取时间、正丁醇萃取次数等进行了考察，最终确定了文中的方法，结果准确、稳定，且重现性好。

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