薄层扫描法测定肾特康胶囊中黄芪甲苷含量

蔡 虎 ．李冬云 (1．陕西省医疗器械检测中心，陕西西安 71006l； 2．西安同济医院，陕西西安 710061) 肾特康胶囊由黄芪、生地、水蛭、人参、黄连等中药组成，具有益气养阴、祛湿通络、健脾养胃等功效，方中君药黄芪的有效成分为黄芪甲苷，笔者用薄层扫描法对黄芪甲苷含量进行测定，效果颇佳，现报道如下。 l 仪器与试药 CamagⅡ薄层扫描仪(瑞士卡码公司)，薄层手动铺板器(上海)，定量毛细管(锡山市东升塑料五金厂)，硅胶G(青岛海洋化工厂)。黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为0781—200105)；肾特康胶囊(西安同济医院自制，批号为040704，040705，040706，规格为O．45 g／粒)；所用试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2．1 溶液制备 精密称取黄芪甲苷对照品2 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL中含黄芪甲苷0．2 mg的对照品溶液。精密称取肾特康胶囊内容物4．5 g，置索氏提取器中，加氯仿回流1 h，弃去氯仿液及药渣，挥干溶剂，再加甲醇回流4 h，滤过，蒸干甲醇，残渣加水30 mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取5次．每次20 mL，合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤2次，每次20 mL，取正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并定容于5 mL量瓶中，摇匀，即得供试品溶液。 2．2 薄层色谱条件及扫描条件 色谱条件：硅胶G自制板，厚度0．3mm，于105％活化30min；展开剂A为三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一水(15：40：22：10)，展开剂B为三氯甲烷一甲醇一水(65：35：10)，均为IO℃以下放置过夜的下层溶液；显色剂：10％硫酸乙醇溶液；显色条件：105℃烘数分钟；扫描条件：测定波长λs=510 nm，λr=700 nm。 2．3 测定方法 分别吸取对照品溶液2，4μL和供试品溶液3 μL，交叉点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂A展开至10 cm，取出，冷风吹干，再以展开剂B展开至约15 cm，取出，晾干。喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘数分钟，至斑点显色清晰，取出。在薄层板上覆盖一块同样大小的玻璃板．周围用胶布密封后进行薄层扫描，测定供试品与对照品的吸收度积分值，计算即得含量。 2．4 方法学考察 空白干扰试验：按处方比例取生地等药材，制成缺黄芪的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各lO ILL，依法测定，结果阴性对照样品对黄芪甲苷的测定无干扰(见图1)。 线性关系考察：精密吸取对照品溶液2，4，6，8，lO ILL，点于同一硅胶G薄层板上，依法操作，测定斑点吸收度积分值。以浓度(x)为横坐标、吸收度积分值(r)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程r=19 887．5x+267．3，r=O．999 2(n=5)。黄芪甲苷点样量在O．4—2μg之间与吸收度积分值呈良好线性关系，但不经过原点，故采用外标两点法进行薄层扫描测定。 稳定性试验：精密吸取对照品溶液6．OμL，点于硅胶G薄层板上，展开，显色，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，四周用胶布固定，每隔l h扫描1次，测定吸收度积分值。结果吸收度积分值的RSD：2．5％，表明溶液在6h内稳定． 精密度试验：取同一供试品溶液，在同一硅胶G薄层板上点6个等量的点(各2 μL)，展开，显色，扫描，测定。结果斑点吸收度积分值的RSD：1．3％，表明方法精密度良好。 加样回收试验：取已知含量(0．042 rag／粒)的肾特康胶囊内容物细粉适量，精密加入低、中、高3种浓度的对照品溶液各2 mL，挥干，照2．3项下方法操作，计算回收率。结果见表l。 重现性试验：精密称取同一批号肾特康胶囊5份，照2．3项下方法测定5次。结果样品中黄芪甲苷平均含量为O．043 mg／粒，RSD：2．5％。 2．5 样品含量测足 依法测定了3批样品，结果批号为040704，040705．040706的3批样品中黄芪甲苷含量分别为0．043，o．045，0．042 mg／粒。 3 讨论 3．1 试验中选择了三氯甲烷一甲醇一水(65：35：10)和三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一水(15：40：22：10)两种展开剂。经过薄层层析比较，单用其中一种展开剂时分离效果均不佳；若先用后者展开10cm后冷风吹干，再用前者展开15 cm，则分离效果较好。 3．2 肾特康胶囊为本院特色制剂，用薄层扫描法测定其中黄芪甲苷含量，结果灵敏可靠。因此该法可作为控制制剂质量的手段。

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