高效液相色谱法测定蒲公英注射液中咖啡酸和绿原酸含量

张西如，姜建国 (河北省药品检验所，河北石家庄 050011) 蒲公英注射液是由蒲公英全草经水煮、醇沉后制成的灭菌水 溶液。蒲公英的化学成分主要为蒲公英甾醇乙酸酯、咖啡酸、绿原 酸、胡萝卜苷等。笔者采用高效液相色谱法(HPLC法)同时测定了其 中咖啡酸和绿原酸的含量，报道如下。 1 仪器与试药 515型高效液相色谱仪(美国Waters公司)；GS2010色谱工作站 (北京精瑞科技有限公司)；超纯水制备仪(美国Millipore公司)； BP211D型电子天平，BP一20型酸度计(德国Satorius公司)．咖啡酸对 照品(批号为110885—200102)，绿原酸对照品(批号为110753— 200212)，购于中国药品生物制品检定所；蒲公英注射液(河北省人民医 院制剂室)；甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸为优级纯，其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 测定波长选择 用甲醇将绿原酸、咖啡酸对照品分别稀释成浓度为0．02 mg／mL 及o．2 mg／mL的溶液，于200．300 nm波长内扫描，结果最大吸收 波长咖啡酸为323 nm，绿原酸为318 nm(见图1)。由于制剂中咖啡 酸的含量较低，故选择323 nm为测定波长。 2．2 色谱条件 分析柱：岛津VP—ODS C18柱(l50 mm x4．6 mm，5μm)；流动 相：甲醇一乙腈一磷酸氢二钠缓冲液(18：2：80，称取磷酸氢二钠 1．56 g加水800 mL使溶解，加三乙胺2 mL，用磷酸调节pH值为 4．0，加水至l 000 mL，即得)；检测波长：323 nm；流速：1．O mL／min； 柱温：25℃。 2．3 测定方法 精密称取咖啡酸对照品10．18 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇适 量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取溶液5．00mL，置50mL量 瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得咖啡酸对照品溶液。精密称取 绿原酸对照品10．45 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀 释至刻度，摇匀，即得绿原酸对照品溶液。精密量取样品5．oO mL， 置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液．取咖 啡酸、绿原酸对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪， 记录色谱图，按外标法计算样品中咖啡酸、绿原酸的含量。其HPLC 图见图2，可见，咖啡酸和绿原酸色谱峰与其他成分峰能很好地分离． 2.4 方法学考察 线性关系考察：精密量取咖啡酸、绿原酸对照品溶液l，5，10， 15，20 μL注入色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标、进样量 (μg)为横坐标进行线性回归，得回归方程咖啡酸r：l 696．47x+ 6．1263 x 106(r=O．999 6)，进样量线性范围是O．02036-O．407 μg； 绿原酸y’=10 861．65X’+3．661 O x 106(r’=0．999 8)，进样量线 性范围是O．209—4．18 μg. 稳定性试验：取供试品溶液，在0，2，4，6，8 h时分别进样lO μL， 记录色谱峰面积。结果咖啡酸RSD为1．0％，绿原酸RSD为1．2％。 精密度试验：取两种对照品溶液，重复进样5次，每次10 txL， 记录峰面积。结果咖啡酸RSD为0．53％，绿原酸RSD为O．41％。 重现性试验：取同一批号的样品(批号为050210)5份，依法测定， 以外标法分别计算。结果咖啡酸的平均含量为47．10 Ixg／mL，RSD为 0．71％；绿原酸的平均含量为476．19 Ixg／mL，RSD为O．95％。 加样回收试验：精密量取已知含量的样品溶液(批号为 050210，3．OO mL，置10 mL量瓶中，分别精密加入绿原酸对照品溶 掖(209．0μg／mL)及咖啡酸对照品溶液(20．36 txg／mL)各4．O， 5．0，6．OmL，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取溶液各10 μL，注入液相 色谱仪，记录色谱图，以外标法分别测定。结果见表l。 2．5 样品含量测定 取待测样品按2．3项下方法进行含量测定。结果批号为050210． 050523，041228的样品中绿原酸和咖啡酸含量分别为476．19 I．zg／mL 和47．10μg／mL，482．88 Ixg／mL和49．91 I．μg／mL．456．33 μg／mL 和38．16 txg／mL。 3 讨论 3．1 HPLC法测定咖啡酸和绿原酸的流动相有多种，最常用的是 甲醇一0．1％磷酸溶液(85：15)，曾试用了不同比例的流动相测定 分离效果均不佳。经过比较和考察，确定了不经萃取而直接同时测 定咖啡酸和绿原酸含量的HPLC法，可使两者色谱峰与相邻峰达到 基线分离，方法简便，结果准确。 3．2 高效液相色谱法专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于 该制剂的质量控制和分析。

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