知母多糖的体外抗氧化作用研究

  知母Anemarrhena asphodeloides Bge．为百合科植物知母干燥根茎，性苦，寒；归肺、胃、肾经，具有清热除烦、滋阴降火、清肺润燥等功效。知母多糖 Anemaran(AM)为知母干燥根茎提取出来的一种多糖，研究表明知母多糖对实验性高血糖小鼠有明显的降血糖活性。本文采用比色法测定红细胞溶血的方法，进一步研究知母多糖的体外抗氧化作用。1材料与方法

1．1药品与试剂

知母多糖为本实验室制备，批号为050310；氯化钠：国产分析纯；磷酸氢二钠：国产分析纯。

1．2仪器

  721型分光光度计，为上海第三分析仪器厂生产；LGl0-2．4A高速离心机为北京医用离心机厂生产；电热三用水箱为北京医疗设备厂有限责任公司生产。

1．3试验用血

吉林大学第一附属临床医学院提供。

1．4方法

 1·4·1 AM对红细胞自氧化的影响取2 mL抗凝健康人血用pH值为7．4的磷酸盐缓冲溶液(PBS)。冲洗、l 500 rpm离心3次，第一次和第二次离心分别为5 min，第三次离心10 rain，然后用 PBS配成1％的红细胞悬液。取2 mL 1％红细胞悬液加入含有不同浓度的知母多糖的P．BS溶液l mL(终浓度分别为：0．33、0．17、0．08 mg．mL)．以 PBS组为对照组加入PBS 1 mL。37℃温浴24 h后，1 500 rpm离心10 min，540 nm处测定各管光密度值，以对照组为100％溶血，计算溶血度。每次实验设三个平行管，取平均值为一次实验的数据，实验重复3次。(以下实验同)

1·4．2 AM对H202所致红细胞氧化溶血的影响取上述红细胞悬液2 mL，加入含有不同浓度的知母多糖的PBS溶液1 mL(终浓度为：0．33、0．17、0．08 mg mL)以PBS为对照组，每管加入H202(终浓度为0．33％)同时设正常红细胞组，加PBS不加 H202。37℃温浴1 h后，1500 rpm离心10 min，于415 nm测定各管光密度值。1．5  统计学处理用SPSS统计软件包进行方差分析，数据用标准差(x±s)表示，实验组与对照组问进行Newman-Keuls检验。

2结果

2．1 AM对红细胞自氧化溶血的抑制作用

    试验结果显示，红细胞经温浴24 h后，可出现明显溶血，知母多糖各剂量组均可抑制红细胞的自氧化溶血作用，并呈现一定的剂效关系。经方差分析，AM各剂量组与对照组比较均有显著性差异(P<0．05)

  2．2 AM对H2O2所致红细胞氧化溶血的抑制作用

    H20z为强氧化剂，可以破坏红细胞膜，导致血红蛋白溢出。知母多糖可以明显抑制H2o2的这种作用，方差分析显示，F=90．625；AM在终浓度为O·33、0．17、0．08 mg·mL一组均有显著性差异(P<O．01).

3讨论

    大量试验证明，氧自由基的产生与多种疾病有 关，如各种炎症、老年性白内障、动脉粥样硬化、老年性痴呆、衰老等。在生理情况下，活性氧处于较低的水平，其产生和清除处于动态平衡，但在某些病理情况下，其产生与清除的平衡被打破，将导致机体损伤。在机体内红细胞是一种具有运输O2及 C02的作用的细胞，其膜内的血红蛋白使其功能的发挥成为可能，一旦细胞膜发生破坏，其内部的血蛋白外溢，红细胞被破坏其运输能力便丧失。因出筛选具有清除氧自由基功能的有效药物是很有必要的。最近有文献报道，黄酮醇及其苷类也可以保护红细胞膜的自氧化作用。本文着重研究了体外知母多糖的抗氧化能力，发现知母多糖对于红细胞膜自氧化和H202所致的红细胞氧化溶血具有显著的抑制作用，红细胞膜易受到氧自由基的攻击发生脂质过氧化而使红细胞膜的完整性破坏，导致溶血，知母多糖的抗氧化作用可能与抑制脂膜过氧化有关。以上结果提示知母多糖具有体外抗氧化作用并呈一定的量效关系，对红细胞膜具有保护作用。

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