金钗石斛提取物抗白内障的体外实验研究
之一。当前许多中药研究都是从提高晶状体抗氧化能力入手，利用抗氧化剂或抗氧化酶激活剂来消除或中和晶状体中的氧化产物，阻止或逆转晶状体变浑浊，从而抑制或延缓白内障的发生发展。石斛具有抗白内障的主治功效。已有研究证实，石斛水煎剂可通过改变晶状体相关酶的活性而对D．半乳糖性白内障起到防治作用，石斛的乙酸乙酯提取物在体外还可抑制醛糖还原酶和过氧化脂质(LP0)的产生，这些研究在一定程度上揭示了石斛抗白内障的作用机理；然而，石斛化学成分复杂，它抗白内障的具体有效成分是什么，至今仍未见报道。本试验通过体外培养晶状体，对金钗石斛Dendrobium nobile Lindl．的提取物总生物碱(total alkaloids)和粗多糖(polysaccharides)抗白内障的作用进行了探讨。
1材料和方法
1．1试验材料
动物4～5周龄Wistar大鼠20只(广州中医药大学实验动物中心提供)，体重80～
药材和试剂 金钗石斛，贵州赤水信天石斛有限公司提供。DMEM低糖培养基(杭州吉诺生物医药技术有限公司)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，磷酸盐缓冲液(福州迈新生物技术开发公司)，30％过氧化氢溶液(浙江临安化工二厂)，吡诺克辛钠滴眼液(武汉天天明药业有限责任公司，批号：070102)，Bradford蛋白质定量试剂盒(上海申能博彩生物科技有限公司)，谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品，其余试剂均为国产分析纯。
试剂配制改良碘化铋钾试剂：甲液：0．
仪器 E-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，恒温水浴箱(余姚市亚星仪器仪表有限公司)，SHZ-D(III)循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂)，电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)。SW-CJ-IF型净化工作台(苏州净化设备厂)， C02培养箱(美国RS Biotech，Galaxy-s)，解剖显微镜(日本OLYMPUS，ST-PT)，低温高速离心机(德国 eppendorf，5810-R)，7200型分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)。1．2试验方法1．2．1金钗石斛总生物碱和粗多糖的分离提取及检识金钗石斛总生物碱和粗多糖的提取方法参照文献，并加以改进：取干燥金钗石斛切碎打成粗粉，加入95％乙醇85~C回流提取3次(4 h／次)，合
并提取液，减压浓缩回收乙醇后得到石斛浸3％盐酸调节浸膏的pH值至3，氯仿萃取3 7俎氯仿层，加浓氨水调母液pH值至11，再经氯仿3次，将氯仿层合并，减压浓缩，挥干氯仿后即总生物碱。将醇提后的药渣晒干后加入20倍的水，100~C回流提取(2．5 h／次×4次)，合并液，减压浓缩后，加入95％乙醇，调至醇浓70％，置于冰箱内，隔夜取出过滤后得到的沉淀用无水乙醇和丙酮各洗涤三遍，再经sevag潮白处理，冷冻干燥，得到粗多糖。总生物碱的检照文献，取少量分离所得的总生物碱于试管加入蒸馏水和少许二甲基亚枫(DMSO)将其充解，点在薄层板上，喷雾改良碘化铋钾试剂后，可薄层板上在提取物溶液的点显现出非常明显的色斑点，由此证明提取物为生物碱成分。粗多检识参照文献：取多糖水溶液1 mL加入M试剂3滴，摇匀，倾斜试管，沿试管壁缓慢滴加浓硫酸，静置，见在试液与浓硫酸交界面产生非常显的紫色环，证明提取物为多糖成分。
1．2．2药物配制 用磷酸盐缓冲溶液(PBS)分将总生物碱和粗多糖配制成浓度为50 mg/mL液(生物碱加少许DMSO助溶)，微孔滤膜过滤菌处理后一20~C保存备用。
1．2．3晶状体的培养及分组参照文献6的方法并略加改进：颈椎脱臼处死大鼠，用眼科剪科镊迅速摘取双眼眼球，用含800μ／mL青霉800μg/mL链霉素的PBS漂洗眼球后，置入含同浓度双抗液的PBS液中浸泡，传人超净台。 rain后将大鼠眼球转移至含500 u／mL青霉素μg／mL链霉素的DMEM培养液中，小心从眼球部剪开巩膜，取出晶状体，去除晶状体表面的虹玻璃体，晶状体经PBS液漂洗2遍后，再用DME液漂洗l遍，然后再放入已预热的24孔组织培中培养，每孔含1 mL DMEM培养基(含20％胎清、100 u／mL青霉素、100μg/mL链霉素)，预培养 h(37．
将35只未受损伤、透明的晶状体按照随机分组培养，设7个组，每组5只晶状体。①正常组(DMEM培养基+10％胎牛血清)；②模型对(正常组培养基+2 mmoL／L 30％H，O，)：③～⑥为生物碱高剂量组、生物碱低剂量组、多糖高剂量组、多糖低剂量组.
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