高效液相色谱法测定金钱草颗粒中槲皮素和山奈素的含量

何 羽，薛朝金 (贵州省毕节地区药品检验所 551700) 金钱草颗粒为单味药制剂，具有清利湿热，通淋消肿的功效。用于热淋，沙淋，尿涩作痛，黄疸尿赤，痈肿疔疮，毒蛇咬伤，肝胆结石，尿路结石等症的治疗。所含的槲皮素和山奈素为主要有效成分。本方收载于《国家中成药标准汇编》(中成药地方标准上升国家标准部分内科、肝胆分册)标准中无含量测定方法，不利于制剂的质量控制。本文参考有关文献，采用HPLC法测定金钱草颗粒中槲皮素和山奈素的含量，分离度好，回收率高，能有效控制金钱草颗粒的含量。 1仪器与试药 1．1 仪器美国Watersl525高效液相色谱仪、2487双波长紫外检测器，Breeze色谱工作站，AY-120电子天平(日本岛津公司)，AB265-S电子天平(日本岛津公司)。 1．2试药槲皮素对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号100081-200406，含量97。3％，120℃干燥4 h后使用)；山奈素对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号：110861-200304)，样品由重庆某药厂提供(批号：040509，040603，040401)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2。1 对照品溶液的制备 精密称取120℃干燥4 h的槲皮素对照品10．41 mg，置100 ml容量瓶中，加80％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含槲皮素101．289 3 pg)。精密称取山奈素对照品10．25 mg，置100 mI容量瓶中，加80％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含山奈素102．5μg)。作为对照品储备液。 2．2样品溶液的制备取本品10袋的内容物，混匀，研细，精密称取1 g，置锥形瓶中，精密加80％甲醇50 ml，称定重量，超声30min,放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25 ml，精密加入盐酸5ml，置90％水浴中加热水解1h，取出，迅速冷却，转移置50 ml容量瓶中，用80％甲醇稀释置刻度，摇匀，即得。 2．3 色谱条件与系统适应性实验采用十八烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱；以甲醇一0．4％磷酸溶液(45：55)为流动相；流速1．0m1．min．；检测波长为360 nm。理论板数以槲皮素峰计算大于6 000，主峰与相邻杂质峰之间的分离度大于1．5。结果见图l。 2．4 线性关系考察 分别精密吸取槲皮素对照品储备液1．oml，分别置10，25，50，100，200 m1容量瓶中，各精密加入山奈素对照品储备液5。0 m1，加80％甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列混合对照品溶液。按上述色谱条件分别进样测定，以峰面积积分值A为纵坐标，以槲皮素和山奈素的浓度C(μgml)为横坐标，其标准曲线回归方程和线性范围结果见表1。 2.5 精密度实验精密量取上述对照品溶液10 μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定，槲皮素和山奈素峰面积积分值的RSD分别为O．50％和o。61％。 2。6 重复性实验分别取同一批号(批号：040509)样品各5份，照2．2样品溶液的制备和测定方法进行测定，结果槲皮素的平均含量为O．042％，RSD为1．02％，山奈素的平均含量为O．168％RSD为0．52％。 2。7 稳定性实验取同一批号的供试品溶液(批号：040509)，每隔2 h进样1次(10 μ1)，共进样6次，按上述色谱条件分别测定，结果槲皮素和山奈素的RSD分别为1．24％和1．55％，表明供试品溶液在12 h内稳定。 2．8 空白实验按处方比例及工艺，制备缺金钱草的阴性制剂，再按供试品溶液制备方法制备不含金钱草的阴性对照品溶液，进样10μ1测定。结果阴性对照品溶液分别在与槲皮素和山奈素对照品相同保留时间位置未见有相同保留时间的吸收，说明辅料对本方法测定槲皮素和山奈素的含量无干扰。见图谱l—c。 2.9 加样回收率实验取已知含量的样品(批号：040509)内容 物适量，精密称定，分别精密加入槲皮素对照品溶液(101．289 3 μg．ml)2．0 m1和山奈素对照品溶液10。0 ml，按照供试品溶液 制备项下的方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表2~3。 2．10 样品测定取3批样品，按上述测定方法进行测定，以外标峰面积法计算样品的含量，结果见表4。 3 讨论 3．1 本实验样品溶液的制备是参照《中国药典》2005年版I部金钱草含量测定项下供试品溶液制备的方法，因本样品为颗粒剂，因此把回流1 h改为超声30 min，经试验证明该法提取效果较好，干扰成分较少。 3．2 试验中以文献提供的色谱条件为基础，改变流动相的比例，通过试验摸索，金钱草颗粒中各组分能够实现较好的分离，证明该条件适合金钱草颗粒的含量测定。 3．3 本文建立的方法简便，专属性及重复好，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制与分析。

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