三七根际土壤化感物质的初步分离鉴定
1 材料
连作三七障碍土壤由文山三七研究院提供，土壤粉碎机(JML-1)，台式恒温振荡器(THZ一92B)，离心机(DL．40B)，低温冷却液循环泵(0LS8-5/l0)，循环水式多用真空泵(SHB．111)，旋转蒸发仪(BUCHI Rotavaper R一200)，硅胶(青岛化工厂)，硅胶G预制薄板(青岛化工厂)，展开剂为氯仿：甲醇：水=9：1：0．1或8：2：0．2、氯仿：丙酮=9：1或7：3，显色剂为10％H，S04-EtOH液。
2 实验方法
分别对文山州不同地点(Ys一砚山、Wm一文山马塘、Wb一文山薄竹、W9一文山古木)共四次(第1次30个样、第2次24个样、第3次24个样、第4次24 个样)连作障碍三七土壤(包括健康土壤、间隔一年、二年、三年、五年、病害的土壤)共102个样进行提取分离。提取方法为：粉碎土壤，过40目筛的土壤装于三角瓶中，加入80％的甲醇；振荡，振荡频率140次/min，温度25℃，2 h；离心(3 000 r／min，10 min，温度25℃)；用滤纸进行过滤，过滤后获得淡黄澄清滤液，弃去残渣；用旋转蒸发仪进行浓缩；将浓缩液用浓盐酸NpH至3，加浓HCL 0．2 mL；石油醚萃取3次，得到石油醚相l和水相1；把水相1用NaOH调pH至10．0(力INaOH 2．5 mL)。用石油醚萃取3次，得到石油醚相2(碱性组分)和水相2(弃去)；把石油醚相lN8％NaOH，pH l0，100 mL／次，萃取3次得到石油醚相3和水相3；把水相3用HCL调pH至3．0，加浓HCL l．0 mL，石油醚l00 mL次，萃取3次得到石油醚相4(酸性组分)和水相4(弃去)；石油醚相3用8％NaOH，pit 6.0，100 mL次，萃取3次得到石油醚相5和水相5(弃去)；把石油醚相5用8％NaOH，pH 8．0，100 mL／次，萃取3次得到石油醚相6和水相6(弃去)；石油醚相6 用8％NaOH，pH l2．0，100 mL／次，萃取3次得到石油醚相7(中性组分)和水相7(弃去)。按以上萃取方法分别对四次样品处理得到碱性样品、酸性样品、中性样品共306个，TLC分析碱性、中性、酸性宅合物127个，并进行鉴定，得到连作障碍三七土壤种7种化合物，分别为：D一谷甾醇(63个)，阿魏酸(22个)，Rhl(4个)，Rh4(5个)，胡萝卜苷26个)，Rgl(5个)，Rl(2个)。
3 结果
3．1 化合物1 白色针状结晶(丙酮)，C29H50O,p ：138-140℃,MW414；对Lieberman—Burchard试剂呈阳性甾醇反应。El．MS m／z(％)：414『M]+(100)，396 127)．381(18)，367(3)，354(5)，329[M一85]+(20)，303 1 34)．289(5)，273[M—sc]’(15)，255(15)，231[M—SC一42]+( 12)．213(16)，145(17)，109(14)，69(25)。1HNMR(CDCl，，500MHz)6：5.30(1H，d，J=5．2 Hz，H．6)，3．50(1H，m，H•3)，0．98(3H，s，H-19)，0．9l(3H，d，J=6．5Hz，H．21)，0．83(3H，d，J=1．8 Hz，H一29)，O．81(3H，d，J=4．0Hz，H-27)，0．80(3H，s，H-26)，0．67(3H，s，H-1 8)；13 CNMR (CDCl3，500 MHz)6：19．8q，19．4q，19．0q，18．8q，12．0q，1 1．9q，21．1t，23．1t，24．3t，26．It，28．3t，31．9t，34．0t，37．3t，39．8t，42．3t，42．3t，121．7d，71．8d，56．8d，56．1d，50．1d，45．9d，36．1d，29．2d，140．85，36．5s，31．6s．以上数据及13CNMR数据与文献[1]报道的B-谷甾醇(B-sitosterO1)基本一致，故推断化合物1为B-谷甾醇(B-sitosterol 。
3．2 化合物2 阿魏酸；4一羟基一3一甲氧基肉桂酸；3一(4一羟基一3一甲氧基苯基)．2．丙烯酸；3一甲氧基一4．羟基肉桂酸；3一(4一Hydroxy-3-methoxyphenyl)-2- propenoic acid；4：Hydroxy一3-methoxycinnamic acid；Ferulic acid；Coffeic acid 3-methyl ether；最初从一种分类上称阿魏属(Ferula)的植物中被发现而得名。有顺式与反式两种，顺式为黄色油状物，反式为正方棱形结晶=熔点l74℃(反式)。能溶于醇、热水和醋酸乙酯，稍溶于醚、难溶于苯和石油醚，可应用于医疗和保健。
3．3 化合物3 白色粉末，m．p：168-171 0C，
[Cc]D26=q-6．4(c 0．36，MeOH)；负离子FAB—MS m/z(％)：637([M-H]-，65)，475([M-H-162]，l2)；1HNMR (Pyridine-d5，400 MHz，)：6H 5．02(1H，d，J=7．6Hz，H-1)，6H 2．07(3H，s，H一21)，1．68(6H，s，H一26，H一27)，1．62(3H，s，H-28)，1．59(3H，s，H-29)， 1．39(3H，s，H-18)，1.02(3H，s，H-19)，o．82(3H，s，H-30)。以上数据及13C NMR数据与文献[2]报道的基本一致，故推断化合物3为人参皂苷Rhl(ginsenoside Rh1)。
3．4 化合物4 白色粉末，m．p：l60-161℃，f Cc]26= +28．2(c l.0，MeOH)；负离子FAB-MS m／z(％)：619 ([M-Hl-，l00);1H NMR(Pyridine—d5，400 MHz)：6H 5．35 (1H，br．t，J=7．4 Hz，H一22)，6H 5．01(1H，br．t，J=7．4 Hz，H一24)，6H 4．91(1H，d，J=7．7 Hz，H-1 )，6H 2．08(3H，s，H一29)，1．80(3H，s，H一21)，1．61(3H，s，H一27)，1．66(3H，s，H一26)，1．56(3H，s，H一30)，1．22(3H，s，H一28)，1．03(3H，s，H一18)，0．81(3H，s，H．19)。以上数据及13C NMR数据与文献[3]报道的基本一致，故推断化合物4为人参皂苷Rh4(ginsenoside Rh4)。
3．5 化合物5 白色无定型粉末，C35H60O6，m.P．288-289 0C，MD23=一40．83。(c 0．63，吡啶)；3400(OH)，2490，2930，2850(CH3，CH2)，1628(C=C)，1375，1365(-CH3及偕二甲基)，1150，1068，1015(C-0)．MW576; EIMS m／z 414(苷元，6)，396(100)，381(7)，329(2)，303(5)，255(12)，231(3)，187(3)，161(15)，145(21)，133(12)，119(10)， 107(17)，95(22)；1HNMR(C5D5N，500 MHz)6：5．33(2H，d，J=2Hz，H一1，H一6)，5．05(1H，d，J=7．4Hz，H一1)，3．94(1H，m，H一3)；”CNMR(C5D5N，500 MHz)：苷元部分：6 140．8，121．7，78．4，56．7，56．0，50．1，45．9，42．3，39．8，39．2，37．3，36．7，36．2，34．0，32．0，3 1．9，30．0，29．3，28．3，26．2，24．3，23．2，21．0，19．8，19．2，19．0，18．8，11．9，11．8；葡萄糖部分：102．4，78．3，77．9，75.1，71．5，62．7．以上数据及l3CNMR数据与文献[4]报道的胡萝卜苷(daucostero1)基本一致，故推断化合物5为胡萝卜苷(daucostero1)。
3．6化合物6白色粉末，m．P：191-194℃，[α]D27= +19．5(C 0．68，MeOH)；负离子FAB—MS m／z(％)：800([M]，100)，637([M—H-162]一，l0)；1H NMR (Pyridine—d5，400 MHz)：6H 5．32(1H，br．s，H一24)，5．13 (1H，d，J=7．7 Hz，H一1”)，4．98(1H，d，J=7．7 Hz，3-1 )， 8H 2.12(3H，S，H一21)，1.66(3H，S，H-27)，1.62(3H，S，H-26)，1.38(3H，S，H-29)，1.34(3H，S，H-28)，1.18 (3H，S，H-18)，0.95(3H，S，H-19)，0.93(3H，S，H-30)。白色粉末(BuOH-EtAc)，mp l91-194℃。以上数据及13C NMR数据与文献[5]报道的基本一致，故推断为人参皂苷Rgl(ginsenoside R91)。
3．7化合物7 白色粉末，m．p：211～214。C，[a]D26= +1 7.5(C 0.64，MeOH)；FAB—MS(negative)m／z(％)：93 1([M-H]-，l00)，799([M-H-1 32] 20)，769([M-H -162]，l2)；1H NMR(Pyridine—d5，400 MHz)：8H 5．51 (1H，br．S，H一24)，5．14(1H，d，J=7．7Hz，H一1”)，4．91(1H，d．J=6．8 Hz，H一1’)，4．89(1H，d，J=7．6 Hz，H一1”’)，6H 2．00(3H，S，H一28)，1．60(6H，S，H一26，H一27)，1．58(3H，S，H一21)，1．44(3H，S，H一29)，1．13(3H，S，H一18)，0．96(3H，S，H-19)，0．80(3H，S，H一30)。以上数据及13C NMR数据与文献[2]报道的基本一致，故推断为三七皂苷Rl(notoginsenoside Rl)。
参考文献
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