双黄连口服液
双黄连口服液由金银花、黄芩及连翘经提取精制而成，具有辛凉解表、清热解毒功效，对于上呼吸道感染、扁桃体炎、咽炎、病毒性肺炎等细菌和病毒感染性疾病有一定疗效。其中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩素是其主要活性成分。2005年版《中华人民共和国药典》(一部)采用高效液相色谱法只测定了绿原酸、黄芩苷、连翘苷的含量，而且是采用包括甲醇一醋酸一水、乙腈一醋酸一水的不同流动相分别测定。本试验参照文献[2]，通过优化色谱条件，建立了不经提取分离，利用梯度洗脱法同时测定上述4种成分含量的高效液相色谱法，具有简便可行、准确、快速的特点，减少了配制流动相的步骤和进样次数，提高了工作效率，取得了满意效果。
1仪器与试药
岛津LC-IOATvp高效液相色谱仪；SPD-IOAvp紫外可见检测器；CLSS-VP色谱工作站；CTO-IOASvp柱温箱；7725i手动进样器。绿原酸对照品(批号110753-200212)、黄芩苷对照品(批号1 10715-200514)、连翘苷对照品(批号1 10821-200609)、汉黄芩素对照品(批号110514-200403)均由中国药品生物制品检定所提供。双黄连口服液由中国人民解放军252医院药剂科提供，批号20070115、20070121、20070212。甲醇、乙腈均为色谱纯，磷酸为分析纯，水为三蒸水。
2方法与结果
2．1 色谱条件与系统适应性试验
色谱柱：岛津VP-ODS c柱(
2．2溶液的制备
2．2．1对照品溶液的制备精密称取绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素对照品适量，置10 mL容量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为1．10、1．03、0．51、0．44 mg／mL的对照品母液。
2．2．2供试品溶液的制备精密吸取双黄连口服液1．0 mL，置50 mL容量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，0．45 um微孔滤膜过滤，即得。
2．2．3 阴性对照溶液的制备按处方比例及制备工艺，分别制备缺金银花、黄芩、连翘的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
2．3线性关系考察
分别精密吸取绿原酸对照品母液0．20、o．40、0．75、1．50、3．O mL，黄芩苷对照品母液0．25、0．50、1．O、2．0、3．0mL，连翘苷对照品母液0．20、0．40、0．60、1．20、2．0汉黄芩素对照品母液0．15、o．25、0．50、1．0、2．0 IfIL，对应加入10 IIlL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成5个浓度的混合对照品溶液，进样测定，记录色谱图。以峰面积为纵度标，分别以绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程。绿原酸：Y=1．04×loX+1．40×10，R=0．999 6；黄芩苷：y=3．87×106X--I．26*104，，=0．999 9；连翘苷：Y=6．44×lOSX+1．74×10 ，R=0．9999；汉黄芩素：Y=6．30×IO~X+1．45×lOs，r=O．9999结果表明，绿原酸进样量在0．44～6．60 μg范围内，黄芩苷进样量在0．52～6．18μg范围内，连翘苷进样量在o．20～2．04μg范围内，汉黄芩素进样量在o．13～1．76 μg范围内，线性关系良好。
精密吸取绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素混合对照品溶液注入液相色谱仪，连续进样5次，绿原酸峰面积RSD：1．12％，黄芩苷峰面积RSD=O．86％，连翘苷峰面积RSD=O．72%汉黄芩素峰面积RSD=0．58％。结果表明，所选方法精密度良好。
2．5稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液，分别在O、2、4、6、8、10、12、24 h进样，测定样品中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素的峰面积，结果绿原酸RSD=l_74％，黄芩苷RSD=2．04％，连翘苷RSD=1．81％，汉黄芩素RSD=2．38％，表明样品溶液在24 h内稳定。
2．6重复性试验
精密称取同一批号5份样品，按供试品溶液制备方法制备，进样，记录峰面积，结果绿原酸RSD=1．48％，黄芩苷RSD=1．53％，连翘苷RSD=1．34％，汉黄芩素RSD=1．58％，表明方法重复性良好。
2．7阴性对照试验
分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，按“2．
2．8加样回收率试验
精密量取同一批号0．2 mL双黄连口服液4份于50 mL祠量瓶中，分别加入绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素对照品溶液适量，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，0．45μ微孔滤膜过滤。按“2．
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